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酶标仪科普专栏丨第一期:HTRF 介绍及应用
发布:美谷分子仪器(上海)有限公司浏览次数:35在当今生物医学研究的广袤领域中,高通量药物筛选技术至关重要,而均相时间分辨荧光(HTRF)技术正以其独特的魅力改变着这一领域的格局。
HTRF 技术
HTRF 技术,全称为 Homogeneous Time-Resolved Fluorescence,是一种将荧光共振能量转移(FRET)和时间分辨荧光(TRF)有机融合的创新方法。在微观世界里,能量供体(如铕或铽的穴状化合物)和能量受体(如 XL665 或 d2)分别与研究的生物分子紧密结合。当生物分子相互作用时,供体和受体靠近,发生神奇的荧光共振能量转移现象,产生可供检测的独特信号。
HTRF 实验基于时间分辨荧光(TRF)和荧光共振能量转移(FRET)原理。它使用两种荧光标记,一个是供体荧光团,另一个是受体荧光团。当供体被激发后,在一定条件下会将能量传递给受体,产生 FRET 信号。同时,通过时间分辨技术,能有效区分背景荧光和特定的 FRET 信号,从而提高检测的灵敏度和特异性。
在技术细节方面,包括精心挑选合适的供体和受体荧光标记,它们具有合适的激发和发射波长,且能形成有效的能量转移对;实验在均相溶液中进行,无需分离等步骤,简化了操作;通常采用特定波长的激发光来激发供体荧光团;具备高灵敏度和时间分辨能力的检测仪器,能够准确捕捉 FRET 信号的变化;选择合适的缓冲液体系和反应条件,以确保实验的稳定性和重复性;通过已知浓度的标准品建立标准曲线,用于样品中目标物浓度的定量分析;设置合适的对照实验,包括空白对照、阴性对照等,以确保结果的可靠性;运用专业的数据处理方法对检测到的数据进行分析和解读,得出准确的结论。
HTRF 技术具有众多独特优势。它高效便捷,无需繁琐的清洗步骤,大大节省了实验时间。同时,具有高灵敏度和特异性,能够精准捕捉微弱的信号变化,准确反映生物分子间的相互作用,为研究提供可靠的数据支持。而且,其广泛的适用性使得无论是小分子还是大分子复合物的研究,无论是低亲和力还是高亲和力的相互作用,都能适用。
在实际应用中,HTRF 技术已被广泛应用于多个领域。在药物研发中,助力筛选潜在的药物靶点,评估药物的活性和效能,加速新药的诞生。在免疫学研究中,深入探究免疫细胞之间的信号传导,为免疫治疗提供新的思路和策略。在蛋白质相互作用研究中,揭开蛋白质之间复杂的“交流密码”,揭示生命活动的内在机制。此外,还应用于 GPCRs 配体结合、细胞水平的蛋白激酶实验、蛋白磷酸化、生物治疗药物研发、蛋白互作以及生物因子或趋化因子等研究。例如,在 GPCRs 配体结合的研究中,HTRF 技术可以帮助快速准确地筛选出与 GPCRs 结合的配体,为后续的药物研发提供重要线索。
在进行 HTRF 实验时,要注意试剂准备,精心挑选和准备高质量的 HTRF 试剂,确保实验的准确性。严格按照操作规范处理样本,避免引入误差。正确设置荧光检测仪器的参数,获取清晰可靠的信号。
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2024-08-20 -
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