EZsepAL-B和HLB固相萃取柱应用于动物源食品中地克珠利、妥曲珠利、妥曲珠利亚砜和妥曲珠利砜残留量的检测

地克珠利属三嗪苯乙腈化合物，妥曲珠利属三嗪酮化合物，两种药物都具有广谱抗球虫活性，广泛用于鸡球虫病的治疗。由于地克珠利较易引起球虫的耐药性，甚至与妥曲珠利共用造成交叉耐药性。且有资料证实，妥曲珠利在仔鸡可食用组织中残留时间很长，停药24天后在胸肌中仍能测出残留药物，因此，美国至20世纪末仍未批准该产品上市。

本实验参考标准《动物性食品中地克珠利和托曲珠利砜残留量的测定 高效液相色谱法》（征求意见稿），使用EZsep?AL-B和HLB固相萃取柱进行样品净化，E.T.氮吹浓缩仪进行浓缩，高效液相色谱进行检测，并对方法做了部分优化，从而建立了一种能同时检测地克珠利、托曲珠利、托曲珠利亚砜和托曲珠利砜残留量的分析方法。

关键词：

地克珠利；托曲珠利；固相萃取

1.1 仪器与试剂

LC-20AD液相色谱仪，岛津企业管理（中国）有限公司；

MPREP-SPE08手动固相萃取装置，货号：PZ0008，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

E.T.氮吹浓缩仪，货号：C020017，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

EZsep?AL-B固相萃取柱（2g/12mL），货号：PZ11413，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/3mL），货号：PZ12613，北京莱伯帕兹检测科技有限公司；

冷冻离心机，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科学仪器厂；

乙腈，甲醇等试剂均为色谱纯，购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；

乙酸，无水硫酸钠，氯化钠等化学品均为分析纯或以上，购自国药集团化学试剂有限公司；

甲醇中4种兽药混标/SN/T 2318-2009标准溶液，10μg/mL，坛墨质检科技股份有限公司。

1.2 工作液配制

分别移取10μg/mL的甲醇中4种兽药混标溶液0.01、0.025、0.05、0.075、0.1mL用流动相稀释至1.0mL容量瓶中，得到浓度分别为0.1、0.25、0.5、0.75、1.0μg/mL的标准工作溶液。

1.3 实验部分

1.3.1 样品制备

准确称取猪肝试样5.0g，置于50mL具塞离心管中，先加入10mL乙腈,均质5min。后加入5g无水硫酸钠，1g氯化钠涡旋1min，振荡提取10min，8000r/min离心5min，取上清液移至另一个50mL具塞离心管中，加正己烷30mL，振摇1min，8000r/min离心5min，分离乙腈层。残余物再按上述步骤重复提取一次，乙腈层经同一份正己烷分配，振摇1min，8000r/min离心5min，分离乙腈层，合并乙腈层，作为待净化液，待净化。

1.3.2 净化与浓缩

将EZsep?AL-B固相萃取柱（2g/12mL，货号：PZ11413）以10mL乙腈活化后，取1.3.1待净化液上样，上样结束后再用5mL乙腈淋洗固相萃取小柱，后以7mL80%乙腈水溶液洗脱并收集洗脱液，以E.T.氮吹浓缩仪，60℃氮气浓缩至近干再加乙腈0.5mL，用水稀释至10mL，涡旋，待二次净化。将EZsepT?HLB固相萃取柱（200mg/ 3mL，货号：PZ12613），分别以6mL甲醇、6mL水活化后取1.3.2待二次净化液上样，上样结束后再用5mL10%乙腈水淋洗固相萃取小柱，后以3mL乙腈分三次洗脱固相萃取小柱并收集洗脱液，以E.T.氮吹浓缩仪，60℃氮气浓缩至近干，再加1.0 mL初始流动相，涡旋，微孔滤膜过滤，高效液相色谱测定。

1.4 LC分析

色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；

流动相：A:0.1%乙酸水溶液 B:乙腈；

流速：1.0mL/min；检测波长：250nm；

进样量：50μL。

表1 流动相梯度洗脱表

表2 加标回收率结果

图1 0.25μg/mL混标色谱图

图2 50μg/kg样品添加色谱图

图3 样品空白色谱图

本次实验使用EZsep?AL-B固相萃取柱（2g/12mL，货号：PZ11413）和EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/3mL，货号：PZ12613），北京莱伯帕兹检测科技有限公司，对猪肝中地克珠利、托曲珠利、托曲珠利亚砜和托曲珠利砜残留量进行测定，其加标回收率范围在71.1%~87.4%之间，RSD在2.0%~7.4%之间。准确性和精密度均满足标准要求，且实验方法稳定、可靠。

1.《动物性食品中地克珠利和托曲珠利砜残留量的测定 高效液相色谱法》（征求意见稿）