冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）

YIJI冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙

酰乙酸盐，在组织氧化损伤条件下，产生荧光，来定量检测冰冻组织内活性氧族的存在状况的权威而经典

的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适宜于冰冻动物组织的分析。可以被用

于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，定性检测，

性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxideradical；O2-）、过氧化氢（hydrogenperoxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基

（hydroxylradical；OH-）、过氧化基（peroxylradical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷

氧自由基（alcoxylradical）、氮氧基（nitricOxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitriteanion；ONOO-）

次氯酸（hypochlorousacid；HClO）、半醌自由基（semiquinoneradical）、单线态氧气（singletoxygen）等

细胞内活性氧族（ReactiveOxygenSpecies；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。2',7'-二氯荧光

乙酰乙酸盐（2',7'-dichlorofluoresceindiacetate，DCFH-DA）一种完全自由通过细胞膜的染色剂。一旦被过

氧化氢、过氧化基、过氧亚硝基阴离子等氧化，便产生荧光。据此测定组织细胞内活性氧族的浓度。

产品内容

YIJI清理液（ReagentA）

YIJI染色液（ReagentB）

YIJI稀释液（ReagentC）

产品说明书

毫升

微升

毫升

1份

保存方式

保存YIJI染色液（ReagentB）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保

证12月

用户自备

1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器

培养箱：用于染色孵育

荧光显微镜：用于观察荧光组织

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的YIJI染色液（ReagentB）置入冰槽里融化，YIJI稀释液

（ReagentC）置于室温预热。然后移出

微升YIJI染色液（ReagentB）到新的1.5毫升离心管，

1

加入

微升YIJI稀释液（ReagentC），混匀后，标记为YIJI染色工作液，置入暗室里。然后进

行下列操作。

1．准备5片待测的厚为10微米的未经固着处理的冰冻切片

2．置于室温下，小心加上

4．小心加上

微升预冷的YIJI清理液（ReagentA），铺满整个切片表面

3．小心移去切片上的YIJI清理液（ReagentA）

微升室温预热的YIJI染色工作液，铺满整个切片表面

5．在37℃湿润培养箱里，孵育20分钟（注意：避免液体蒸发）

6．小心移去切片上的YIJI染色工作液，避免光照

7．小心加上

微升YIJI清理液（ReagentA），铺满整个切片表面

8．小心移去切片上的YIJI清理液（ReagentA）

9．放上盖玻片或封片

10．即刻在荧光显微镜下观察（定性检测）：激发波长490nm，散发波长530nm――荧光增强，表明活性氧

族（ROS）含量高

注意事项

1．本产品为50次操作

2．所有操作均须无菌状态下进行

3．建议使用新鲜组织（手术切除后1小时内）制成的冰冻切片

4．操作时，须戴手套

5．YIJI染色工作液避免光照

6．孵育时，须避免光照

7．建议组织染色完成后，即刻进行荧光定性分析

8．本公司提供阳性对照甲萘醌溶液，观察组织荧光增强现象

9．本公司提供系列活性氧检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定荧光清晰

2

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