影响ELISA实验的因素和对策

在ELISA 操作中，洗涤是Z主要的关键技术，操作时尤为注意： 保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板後**在吸水纸或毛巾（选择干净无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干（若使用易掉渣的纸，纸屑会留在板孔中，由于纸屑中含有氧化剂而造成高值阴性）； 注意各种试剂盒的洗液不要混用如果洗液需要稀释，应按要求稀释，所用的水电导率**在1.5us/cm 之下，洗液如果结晶应待其融解後配制 保证洗板浸泡时间为40 秒左右，孔内液体被洗板机吸收得越干净洗涤效果更好，手工洗板防止洗液在孔内形成气泡 合理安排，或多用几台洗板机 在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间 参考ELISA#洗涤 显 色： 结果不好的可能原因 显色剂配制後放置时间过长或使用过期显色剂； 加显色剂时溅出孔外造成液体回流 解决方法： 显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用； 加样时保持显色剂不外流，且加样量要准确，顺序不能颠倒 AB液应避免接触金属器械 可以参考ELISA#显色和比色 终 止： 结果不好的可能原因： 加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加 解决方法： 加终止液时应避免产生气泡，及时终止显色 读 板： 结果不好的可能原因： 读板时板底底部不透明带水滴有划痕及不规则的表面 应保证酶标板清洁 此外酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，操作时室温宜在15~30，使用前先预热仪器15-30 分钟，测读结果更稳定