微量分光光度计原理及应用介绍

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于微量分光光度计原理及应用介绍：

    微量分光光度计能够快速准确的定量检测核酸、蛋白质等溶液。具有使用方便、消耗样品少(仅2μl)、不用预热、能迅速清理残留样品、不需要比色皿或其它样品定位装置、样品不需要稀释等特点，常用于核酸，蛋白定量以及生长浓度的定量，目前已成为众多实验室的常规仪器。

  工作原理

    超微量分光光度计进行浓度测定的原理是根据朗伯-比尔（Lamber-Beer）定律，

A＝K·C·L

 式中，A为吸光度；K为吸（消）光系数；C为溶液的浓度；L为液层厚度。此公式说明：在入射光一定时，溶液的吸光度与溶液的浓度及液层厚度成正比。此式就是光的吸收定律的数学表达式，又叫朗伯-比尔定律。

  核酸定量

     核酸的定量是超微量分光光度计使用频率高的功能。可以定量测定溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA以及RNA含量。这是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键，具有紫外吸收的特性，大的吸收波长在260nm，吸收波谷在230nm。

    除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。

  蛋白质直接定量

     这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如DNA的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。

  比色法蛋白质定量

     蛋白质通常是多种蛋白质的化合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。

     比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry 等几种方法。

以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于微量分光光度计原理及应用介绍。

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