浅析DC疫苗疗法和生产流程（下：质控与鉴定）

DC树突状细胞，也包括来源于单核细胞的Mo-DC在内的树突状细胞，由于具有摄取、处理和呈递抗原给T细胞的能力，是免疫应答的关键调解者。DC肿瘤疫苗即利用了DC细胞提呈抗原、激活免疫的功能，借助DC细胞来指挥T细胞。通过体外诱导或构建特异性识别肿瘤的DC细胞，并将其扩增后回输到肿瘤患者体内，可以激活T细胞对肿瘤产生免疫反应，从而实现治疗的效果。^[1]基于DC疫苗的多种优势，该疗法在临床应用中取得了巨大进展。全球临床试验数据已超过1200个DC项目，其中美国最多，欧洲次之，中国也有超过130个项目正在临床试验中。

表1.树突状细胞亚群的关键转录因子、表面标志物及其功能

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支原体是已知最小的独立生存有机体，常常被称为高价值细胞系狡猾的入侵者或无声杀手。按照法规指南要求，所有源自哺乳动物细胞培养的产品必须进行支原体检测。支原体污染的早期准确检测有助于确保符合法规指南要求，防止污染扩散到下游过程和培养基。

Applied Biosystems MycoSEQ 支原体检测系统：基于实时PCR（qPCR）的支原体检测集成解决方案，可在大约五小时内提供准确、可行的结果，满足多种治疗模式下对支原体检测的现有监管指南要求。

在细胞治疗生产背景下，无菌快速检测在确保最终产品的质量和安全方面发挥着关键作用。生产过程的快节奏加之细胞治疗产品的有限保质期，促使必须在整个工作流程进行早期检测，预防进一步污染。实施无菌快速检测，能够发现潜在污染源，并及时进行处理。该方法有助于减少产品损失和生产意外延迟的风险，最终提高工作流程的效率。此外，该方法保留了细胞治疗产品的完整性和有效性，进一步提升整体质量。

Applied Biosystems SteriSEQ 快速无菌检测系统：基于实时PCR（qPCR）的解决方案，可对细胞治疗产品进行快速无菌检测，在五小时内提供可分析的qPCR结果。该整体解决方案高效，准确，可以帮助客户及早发现潜在的污染事件，增加对最终产品的信心。

在DC细胞的生产流程中，需要对细胞浓度和活率进行检测。考虑到DC细胞体积较小，形状不规则，且可能受到样品中红细胞、血小板或者其他碎片的干扰，采用AO/PI荧光法进行细胞浓度和活率计算，其获取的准确度高，重复性好。

Countess 3FL自动细胞计数仪，采用人工智能细胞计数，引入机器人学习算法，小细胞计数准确，有效排除红细胞和血小板等的干扰。自动照明、自动聚焦等的参数设置，排除人为差异，提高数据的重复性。提供具有审计追踪功能的SAE软件，符合FDA 21CFR part 11的数据要求。

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流式细胞仪在DC细胞治疗的研发、生产和质控中发挥着重要作用，主要应用包括DC细胞表型鉴定、细胞功能检测、DC细胞与靶细胞间的相互作用，以及细胞因子风暴检测等。

Attune流式细胞仪家族有2个型号，分别是Attune NxT声波聚焦流式细胞仪和Attune CytPix成像型流式细胞仪，主要技术优势是快速且不堵的流式细胞分析仪。

DC细胞质控和鉴定过程中，需要对多种细胞因子进行监测，比如肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素(interleukin, IL)-12、IL-1 beta、IL-4、IL-6、IL-10、INF-γ、CD27、CD28、CD40、CD40L、CD80等。赛默飞ELISA、Proquantum和多因子检测试剂盒，具有规格多，类型多，重复性好，稳定性高等特点。

参考文献

1.Hu Z, Ott PA, Wu CJ. Towards personalized, tumour-specific, therapeutic vaccines for cancer. Nat Rev Immunol. 2018 Mar;18(3):168-182. doi: 10.1038/nri.2017.131. Epub 2017 Dec 11. PMID: 29226910; PMCID: PMC6508552.