产品应用 | Bigfoot分选流式用于iPSC单克隆分选，助力高质量细胞突变模型方法建立

新技术和大规模队列研究使新的变异株能够在未经证实的范围内发现和关联，但这些变异株的功能特征对于破译疾病仍然至关重要。有助于对感兴趣的细胞或诱导多能干细胞（iPSC）并行基因编辑的方法已经成为实现这一目标的关键工具。本文中，作者开发了一种方法，将CRISPR-Cas9 guideRNAs（gRNA）文库和诱导型Cas9一起整合成一个piggyBac（PB）转座子系统，构建数十到数百个基因组突变体。这种方法通过引入插入或缺失（indel）和拷贝数变异（CNVs），尽管产生特定的核苷酸变化可以进行原始编辑。大规模快速建立高质量突变模型的能力将有利于等位基因细胞集合的建立，并催化研究数百个基因和突变在发育和疾病中作用的比较功能基因组研究的发展。

▲用于并行化基因组工程的PB系统

示意图概述了PB系统实验工作流程。（上）将gRNA文库克隆到PB质粒载体中。（中）通过PB转座子细胞传递和移除CRISPR组件可实现多因子、时间控制编辑。（下）分离单细胞建立克隆化iPSC细胞系，使用MIPs进行基因分型以鉴定突变模型。

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