Dr.赛流式小课堂 | 轻松上手流式染色细胞因子实验

细胞因子是一类分泌性蛋白质或多肽，它们在细胞间传递信号并调节细胞的生理和免疫功能。细胞因子在多种生物过程中发挥重要作用，包括细胞增殖、分化、存活、炎症反应和免疫应答等。

细胞因子在多种疾病发生和发展中发挥重要作用，细胞因子风暴（cytokine storm，CS）是一种全身性炎症反应，过度激活的免疫系统可能会导致炎症细胞死亡，从而进一步促进致病的细胞因子释放，最终造成全身炎症。因此，研究和理解细胞因子的功能和调控机制对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。

图1. 细胞因子风暴机制示意图^[1]

^{Karki R, Kanneganti TD. The 'cytokine storm': molecular mechanisms and therapeutic prospects. Trends Immunol. 2021 Aug;42(8):681-705. doi: 10.1016/j.it.2021.06.001.} 

细胞因子流式染色时，往往会发现染色的信号很弱，即便换成荧光强度高的荧光基团，效果也并没有太多改善。这通常是由于细胞因子本身表达低，同时也可能会因为其自身是分泌蛋白的特点被转运到胞外，进一步降低了细胞内的表达水平！考虑到这一点，对细胞因子染色前，往往需要对其先进行刺激。

对于细胞因子的刺激活化，通常是使用特定肽或非特异性激活混合物激活细胞，并添加蛋白质转运抑制剂以将细胞因子保留在细胞内。例如可以使用佛波醇（PMA）和离子霉素，来诱导细胞活化，产生细胞因子。同时，辅以Brefeldin A 和莫能菌素，来抑制细胞的蛋白转运功能，使刺激产生的细胞因子在细胞内蓄积。

图2.小鼠脾脏细胞未受刺激（左）或用细胞刺激混合物（加蛋白质转运抑制剂，货号：00-4975-93）（右）刺激 5 小时，流式染色检测细胞因子TNFα表达。

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完成了以上的五个步骤，我们就实现了对细胞因子的染色，后续可以对样本进行上机检测了。

*以上数据均出自赛默飞流式细胞术精品培训班，所用流式细胞仪为Attune? NxT流式细胞仪。