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【聚焦激光】滤光片在流式细胞仪中的应用！

发布：北京先锋泰坦科技有限公司

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文丨张建学

编辑丨瑞秋

发布丨先锋科技

流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质（如大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等）进行快速测量并可分类收集的高技术仪器。

荧光滤光片

流动细胞仪主要有以下四部分构成：

1. 流动室及液流系统；

2. 激光源及光学系统；

3. 光电管和检测系统；

4. 计算机和分析系统。

流动室及液流系统

流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液，一般限制液流速度υ<10m/s。

激光源及光学系统

经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。常用的光源有弧光灯和激光；激光器又以氩离子激光器为普遍，也有配氪离子激光器或染料激光器。

在激光光源和流动室之间有两个圆柱形透镜，将激光光源发出的横截面为圆形的激光光束聚焦成和细胞的直径相近，在这种圆形激光光斑内激光能量成正态分布，使通过激光检测区的细胞受照强度一致。而光学系统则是由若干组透镜、小孔、滤光片组成，主要作用是将不同波长的荧光信号送到不同的光电倍增管。

光电管和检测系统

经荧光染色的细胞受合适的光激发后所产生的荧光是通过光电转换器转变成电信号而进行测量的。光电倍增管（PMT）较为常用。PMT的响应时间短，仅为ns数量级；光谱响应特性好，在200～900nm的光谱区，光量子产额都比较高。也有用硅光电二极管的，它在强光下稳定性比PMT好。

计算机和分析系统

经放大后的电信号被送往计算机分析器。多道的道数是和电信号的脉冲高度相对应的，也是和光信号的强弱相关的。对应道数的纵坐标通常代表发出该信号的细胞相对数目。多道分析器出来的信号再经模-数转换器输往微机处理器编成数据文件

流式细胞仪主要用到三类滤光片：

? 长波通滤光片（LPF）--只允许特定波长以上的光线通过；

? 短波通滤光片（SPF）--只允许特定波长以下的光线通过；

? 带通滤光片（BPF）--只允许特定波长的光线通过。

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