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ibidi实验视频系列之简便免疫荧光实验
发布:上海净信实业发展有限公司浏览次数:101【导读】细胞的免疫荧光实验是一个基础的细胞实验,传统的方法是在培养板中放入预先处理好的盖玻片,待细胞贴壁后,使用镊子将盖玻片拿出再开始进行固定,染色等系列工作。细胞的免疫荧光实验是一个基础的细胞实验,传统的方法是在培养板中放入预先处理好的盖玻片,待细胞贴壁后,使用镊子将盖玻片拿出再开始进行固定,染色等系列工作。
现在分享一种简便的免疫荧光方法,无需爬片,培养,固定,染色,成像,都在一个培养皿/载玻片上完成。
本文章介绍新方法,我们将描述在通道载玻片内培养大鼠成纤维细胞(Rat1)的单个实验案例。然后,我们用AlexaFluor®488鬼笔环肽染色F-肌动蛋白细胞骨架,并用DAPI对细胞核进行复染。
该实验包括四个主要步骤:培养,固定,染色,成像
一:培养
*在无菌条件下打开μ-Slide I ibiTreat(80106)并将其放在μ-Slide架(80003)上。将100μl 3×105细胞/ml Rat1细胞悬浮液加入通道中。如下图所示直接加入通道;
*用提供的盖子轻轻地盖住储液器。不要完全关闭它们;
*将架子放入培养箱(37°C;5%CO2)中,让细胞附着(60分钟)。然后用0.5ml无细胞培养基填充两个储库;
*培养过夜。二:固定细胞
通过使用细胞培养抽吸装置或移液管从储库中吸出整个培养基。用Dulbecco's PBS洗涤细胞,缓慢地将1ml液体施加到一个空的储液器中,并从对面的储液器中吸出。通过在PBS中使用200μl的3.7%多聚甲醛以相同的方法固定细胞。从通道的另一侧移除储液器的液体并等待10分钟。
清洗:
如步骤5中所述,用1ml PBS再次洗涤细胞。
在PBS中使用200μl0.1%Triton®X-100溶液通透3-5分钟。
在PBS溶液中施加200μl的1%BSA溶液封闭20分钟。
用PBS洗涤细胞。三:染色镜检
*从通道中清除所有液体。从通道中吸出液体后,不要让通道干燥。
*用100μlAlexaFluor®488鬼笔环肽(1Unit+500μl PBS+1%BSA,InvitrogenCorp.)在室温下培养20分钟。
*用PBS洗涤细胞并清空通道。
*施用100μlDAPI(0.1μg/ml,Sigma-Aldrich)3-5分钟。
*用PBS洗涤细胞并除去所有液体。用滴管瓶注入100μl Ibidi安装介质。用提供的盖子盖住储液器。μ-Slide可以存储大约4周。
*在荧光显微镜下选择适当的滤镜,也可以使用浸油观察细胞。四:成像
之所能如此简便完成免疫荧光实验,是因为这些ibidi培养皿和载玻片的底部为特殊处理的材质,绝大多数细胞可以直接贴壁生长,而不需要另外包被。同时,这些耗材的底部薄如盖玻片,可以直接使用倒置显微镜进行观察,得到高质量的成像,适用于显微镜比如共聚焦显微镜。
用通道载玻片免疫荧光方法,不仅更加简化实验步骤,而且可以节约试剂和细胞,同时还能得到更理想的成像效果。
2021-12-13相关仪器 -
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