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MTT
发布:杭州奥盛仪器有限公司浏览次数:1913什么是MTT,什么是MTT法
MTT,商品名称噻唑蓝
全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide
汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,一种黄颜色的染料,由于应用于细胞存活率的检测而被熟知。在细胞培养中,MTT不仅仅是一个化学物品,更是一种实验方法。
MTT原理
MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
MTT用途
MTT主要有两个用途
药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养的细胞毒性的测定;
细胞增殖及细胞活性测定。
检测原理如上所述,根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。
MTT实验步骤
普通MTT法实验步骤:
1.接种细胞:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板,每孔体积200ul.
2.培养细胞:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。
3.呈色:培养3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS配制,pH=7.4)20ul.继续孵育4 h,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO,振荡10 min,使结晶物充分融解。
4.比色:选择490nm波长,在酶标仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
MTT检测方法
MTT实验结果常用酶标仪读取,通过比较不同孔间OD值大小来判断细胞生长状况,以此作为比较药物毒性大小或者细胞活性的重要依据。
AMR-100全自动酶标分析仪
AMR-100酶标仪是一款基于滤光片的高品质光吸收酶标仪,波长范围340nm~750nm,适合科研和临床的应用。适用96孔板,可满足不同通量的要求。7英寸触屏液晶显示,易于使用,不需操作键盘,数据和程序可保存在仪器内,或者通过U盘导出。读板速度快,能实现快速测量,提供准确性高,重现性好的测量结果。是实验室酶标仪的理想选择。
技术参数
显示
7英寸彩色触摸屏,分辨率为800*480像素
光源
卤钨灯,寿命可达2000h
波长范围
340-750nm,覆盖整个可见光波长
滤光片
8片滤光片轮,标配4块滤光片:405,450,492,630nm,另可选配340nm-750nm波长滤光片
滤光片带宽
±3nm
读数范围
0-4.000Abs
线性范围
0-2.000A时≤±1% ;
2.000-4.000A时≤±2%分辨率
0.001Abs
准确性(405nm)
±1%(0-3Abs)
±2%(3-4Abs)精确性(405nm)
CV≤0.2%(0-3Abs)
CV≤1.0%(3-4Abs)标准测量模式测量速度
<6S 96孔板整板检测
用户界面
内置软件
操作显示
触屏输入,液晶显示全板信息,可外接键盘鼠标
内存
可存储200个测量程序和10万个测量结果(96孔板)
接口
3个USB接口,分别用于连接电脑,打印机和U盘
电源
AC100-240V,50-60Hz
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