-
解决方案
-
安捷伦寡核苷酸纯化解决方案 | 让你在医药界一路狂飙!
发布:安捷伦科技(中国)有限公司浏览次数:298作为极具前景的治 疗药物,寡核苷酸已成为全 球研发和投资的重 点领域。寡核苷酸受到合成反应效率和原料纯度等多重因素的影响,在合成过程中会产生多种不同的杂质。反相色谱、离子交换等是对寡核苷酸粗品纯化的常用色谱手段。
寡核苷酸纯化工艺,需要充分考虑产品纯度和回收率之前的平衡,有效的纯化放大策略有利于工艺开发和制备放大的顺利进行。下图 1 展示了典型纯化工作流程。
图 1. 采用安捷伦自动纯化软件实现自动化纯化工作流程
安捷伦针对寡核苷酸制备,主要工作流程包括:
1、在分析柱上,进行目标化合物确认和分析方法筛选;
2、将分析数据导入到自动纯化软件中,指定目标化合物并生成“聚焦”制备梯度;
3、在制备柱上进行纯化;
4、自动纯化软件将需要分析的馏分自动生成序列表,以进行馏分分析和纯度确认。
寡核苷酸分析到纯化实例
本实例采用了安捷伦 1290 Infinity II 自动放大 LC/MSD 系统。该系统具有以下特性:
图 2. 安捷伦 1290 Infinity II 自动放大 LC/MSD 系统
在一套系统上实现从分析到制备的放大,提高制备通量
自动馏分延迟传感器技术,以及极低的峰扩散和交叉污染,提高馏分的纯度和回收率
自动纯化软件使工作流程能够从分析自动放大至制备,无需进行方法开发
对于寡核苷酸纯化,安捷伦 AdvanceBio 寡核苷酸系列色谱柱是首 选。这类柱子使用了 Agilent InfinityLab Poroshell 技术,并且键合了高 pH(HPH)键合相。不仅能在较高 pH 和温度下使用,每批 AdvanceBio 寡核苷酸色谱柱还会进行严格质量控制,以实现 n/ (n–1) 寡核苷酸分离。本实例使用色谱柱:
分析柱
Agilent InfinityLab Poroshell HPH-C18, 3 × 100 mm,2.7 µm(货号 695975-502)
制备柱
Agilent AdvanceBio 寡核苷酸色谱柱,21.2 × 150 mm,4 µm(货号 671150-702)
本实例样品
浓度 3.1 mmol/L,溶于 20 mmol/L PBS 中的寡核苷酸样品。
本实例工作流程
1、在分析柱上,进行目标化合物确认和分析方法筛选
表 1. 分析运行的色谱条件,HA/HFIP 法
使用 HPLC/MS 方法(HA /HFIP,二乙胺/六氟异丙醇,见表 1)分析样品(见图 3)。
图 3. 使用 HA/HFIP 和优化的梯度分离样品
根据分析结果提取质谱图,确定寡核苷酸分子量 10704Da。利用 OpenLab ChemStation 中的解卷积工具计算分子量,将信号与电荷数关联(图 4)。在制备时多电荷离子可用来触发馏分收集。
图 4. 通过解卷积计算寡核苷酸分子量和多电荷离子(A:电荷数)
考虑到制备在高流速运行下的溶剂成本,开发了一个不需要用到 HFIP 这类价格较高溶剂的方法(DBA-TRIS,二丁胺-TRIS),见表 2。
表 2. 分析和制备运行的色谱条件, DBA-TRIS 法
用 DBA/TRIS 分离的分析图谱见图 5。
图 5. 使用 DBA/TRIS 和通用梯度分离寡核苷酸
2、将分析数据导入到自动纯化软件中,指定目标化合物,自动生成制备聚焦梯度
将分析数据导入自动纯化软件中,点击设定目标峰,自动纯化软件就能自动生成制备聚焦梯度,见图 6。
图 6. 为寡核苷酸计算制备聚焦梯度
3、在制备柱上进行纯化
定义触发馏分收集的目标质量数,用聚焦梯度进行纯化。图 7 显示了制备分离和馏分收集的情况,共收集了八个馏分片段。
图 7. 使用 DBA/TRIS 和聚焦梯度对寡核苷酸进行制备纯化
4、通过自动纯化软件馏分导出工具,将需要分析的馏分生成序列表进行分析
图 8. 寡核苷酸纯化收集的八个馏分分析的色谱图叠加
馏分再分析的结果见图 8。第 一个馏分(蓝色标记)含杂质,其余所有馏分纯度均 >99%。质谱触发的选择性收集,使得馏分纯度更高。
码上了解
扫描二维码
更多详细信息,可参考安捷伦应用文章-使用制备型 HPLC/MS 和软件支持快速选择性纯化寡核苷酸。
2023-02-22相关仪器 -
免责声明
①本网刊载上述内容,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任
②若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi
-
仪网通钻石会员 第 5 年
安捷伦科技(中国)有限公司
认证:工商信息已核实
- 产品分类
- 品牌分类
- 气相色谱仪(GC)
- 气质联用(GC-MS)
- 液相色谱(LC)
- 液质联用(LC-MS)
- 制备液相色谱
- 超临界流体色谱仪
- 毛细管电泳(CE)
- 红外光谱(IR、傅立叶)
- 紫外、紫外分光光度计、紫外可见分
- 原子吸收光谱(AAS)
- 激光拉曼光谱(RAMAN)
- ICP-AES/ICP-OES
- ICP-MS电感耦合等离 子体质谱
- 自动进样器(多功能)
- 溶出度仪、溶出仪、溶出试验仪
- 液体处理工作站(移液工作站)
- 轴向压缩系统
- 官方服务
- 组织细胞定量分析系统
- 氦质谱检漏仪
- 真空泵
- MP-AES 仪器
- 分子荧光光谱
- 高内涵细胞成像分析系统
- 耗材与备件
- 吸收光酶标仪
- 多功能酶标仪
- 细胞成像分析系统
- 细胞成像多功能微孔板检测仪
- 洗板机与分液器
- 微孔板储板器与自动化培养箱
- 成像仪与多功能微孔板检测仪周边产品
- 实时细胞代谢分析
- 实时细胞分析
- 流式细胞仪
-
仪企号
安捷伦科技(中国)有限公司
-
友情链接
-
手机版开启全新的世界m.yiqi.com/zt475/