特色方案｜维生素 D3 代谢物衍生物的测定

摘要

本文建立了维生素 D3 代谢物衍生物 25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、25(OH)D3-PTAD(6S- isomer)及 C3-差向异构体-维生素 D3 代谢物衍生物 3-epi-25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、3-epi-25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)等 4 个化合物的 LC-MS/MS 测定方法。

结果表明，采用色谱柱 Shim- pack Velox Biphenyl(2.1×50mm,1.8 μm )分析25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、25(OH)D3-PTAD (6S-isomer)、3-epi-25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、3-epi-25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)，4 个同分 异构体能实现很好的分离，此方法可为血清中维生素D3的检测提供参考。

1. 实验部分

1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-30A与LCMS-8050联用系统;

色谱柱:Shim-pack Velox Biphenyl(2.1×50mm 1.8μm;P/N:227-32013-02;S/N:1610319 ); 

SHIMSEN Arc Disc HPTFE 针式过滤器(P/N:380-00341-05);

LC/MS 认证样品瓶 LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);

SHIMSEN Pipet 移液枪:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);

SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04); SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。

1.2 混合溶液的制备

取客户提供的 4 个衍生物母液适量，加甲醇稀释至如下浓度:25(OH)D3-PTAD(6R- isomer)、25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)为 5.3747 nmol/L;3-epi-25(OH)D3-PTAD(6R- isomer)、3-epi-25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)为 3.8467 nmol/L。

1.3 分析条件 

UHPLC 条件

色谱柱:Shim-pack Velox Biphenyl(2.1×50mm，1.8μm;P/N:227-32013-02;S/N:1610319 ) 

流 速:0.3 mL/min

进样量:5 μL
柱 温:30 °C
流动相: A:0.1%甲酸水溶液 B:0.1%甲酸甲醇溶液梯度洗脱程序如下:

质谱条件

离子化模式:ESI，正离子扫描 

碰撞气:氩气
雾化气:氮气 3 L/min

接口温度: 300°C 

加热模块温度:400 °C

扫描模式:多反应监测(MRM)

加热气:氮气 10 L/min

干燥气:氮气 10 L/min

DL 温度:250 °C

4个化合物 MRM 参数见下表

按照上述色谱条件(1.3)进行采集，4 个化合物混合溶液色谱图如下:

4个化合物重现性

本文建立了维生素 D3 代谢物衍生物 25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)及 C3-差向异构体-维生素 D3 代谢物衍生物 3-epi-25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、3-epi-25(OH)D3- PTAD(6S-isomer)等4个化合物的 LC-MS/MS 测定方法。结果表明，采用色谱柱 Shim-pack Velox Biphenyl(2.1×50mm，1.8μm )分析25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)、 3-epi-25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、3-epi-25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)，4个同分异构体能实现很 好的分离，此方法可为血清中维生素 D3 的检测提供参考。