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Western Blot归一化:看家蛋白or总蛋白
发布:艾普拜生物科技(苏州)有限公司浏览次数:307做Western Blot的小伙伴,是不是还在为归一化方法而纠结呢?今天小编就和大家汇总一下看家蛋白和总蛋白归一化的方法。
看家蛋白归一化
使用看家蛋白的缺点是在样品间和不同条件下表达水平可能不一致。如使用看家蛋白进行标准化,必须先花费时间和精力来验证内参的选择。
使用看家蛋白的第二个重大挑战是它们的表达丰度很高,如果样品中的看家蛋白表达非常高,这会限制在凝胶上加载的样品量,如果感兴趣的蛋白不是同样的表达丰度,那这两种蛋白质就不在同一线性检测范围内。
如果您正在进行多重蛋白印迹,例如比较同一蛋白质的磷酸化和非磷酸化形式,则需要考虑的第三个挑战是从不同物种中产生一抗和二抗的复杂性。
检测的看家蛋白可能干扰感兴趣蛋白的检测。理想情况下,看家蛋白应该与感兴趣蛋白的大小不同,因此这两种蛋白可在印迹上空间分辨。当实验在同一印迹上检查多种目的蛋白时,这就变得越来越困难。
总蛋白归一化
使用总蛋白归一化,是直接在膜上检测总蛋白,并且该值在归一化时用作分母。总蛋白染色提供更宽的动态范围,并且表现出比看家蛋白更低的可变性和更准确的定量数据。
与使用看家蛋白相比,图像采集后的分析工作流程基本不变; 整个泳道或泳道中大部分信号用于归一化,而不是单一的条带。
例如:JBC、Narute和Proteomics等期刊会推荐使用总蛋白归一化方法。
使用总蛋白染色剂对膜进行染色提供了质控优势,可以验证转印是否完全。
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2020-07-10相关仪器 -
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