【解决方案】软毛青霉酸的分析方案

(1) 取软毛青霉酸(0.1mg/瓶)1瓶，加入1mL甲醇配制成浓度0.1mg/mL的标准溶液。

(2) 分别取软毛青霉酸标准溶液适量，用甲醇稀释配制成浓度分别为0.1μg/mL、0.2μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的标准系列溶液。

色谱柱：Diamonsil C18(2)，4.6mmx250mm，5μm (Cat.#: 99603)

流速：1.0mL/min

进样量：10μL

柱温：35℃

检测波长：270nm

流动相：乙腈:1%三氟乙酸=10:90

仪器：岛津LC-2040C

3.1 检测波长的确定

软毛青霉酸的紫外扫描图如下图所示。从图中可知，软毛青霉酸的最大吸收波长为270nm。

3.2 线性关系

分别进样7个梯度浓度的软毛青霉酸标准溶液，记录峰面积，以进样浓度( x,μg/mL )为横坐标，峰面积( y )为纵坐标，作标准曲线，并以最小二乘法计算得回归方程：Y=117555X-27508.4(R=0.9996)，结果显示软毛青霉酸在0.001～0.2μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

3.3 检测限及定量限

软毛青霉酸溶液在约10倍信噪比的浓度(S/N=10)即为定量限(LOQ)，LOQ约为0.1μg/mL；约3倍信噪比的浓度(S/N=3)即为检测限(LOD)，LOD约为0.05μg/mL。

3.4 精密度

取1μg/mL软毛青霉酸溶液连续进样6次，记录峰面积，峰面积RSD为0.18%，小于2%，表明仪器精密度良好。

3.5 稳定性

取2μg/mL软毛青霉酸溶液分别在0、24、28、40h进样，记录峰面积，峰面积RSD为0.64%，小于2%，表明标准品溶液在0~40h内能够保持稳定。

综上，得出软毛青霉酸测定方法学验证结果，如下表所示。

标准储备液的配制：取适量标准品，用甲醇溶解并定容，配制成标准储备液，浓度为100μg/mL。

标准上机溶液的配制：取适量标准储备液，用10%甲醇水逐级稀释，配置成浓度为0.1μg/mL标准上机溶液。

(1)UPLC条件

色谱柱：Diamonsil Plus SCX，150x4.6mm, 5μm (Cat.#: 99420)

流速：0.3mL/min

进样量：10μL

柱温：35℃

流动相：A：水  B：乙腈

梯度设置：

(2)质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：负离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：-4500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃

目标物峰面积和峰高汇总结果：