原来可以这样！HMR+溶剂效应消除器结合UPLC-MS/MS检测牛羊奶中有机磷农药残留……

注：Anavo HMR-Lipid是一款新型无机除脂材料，与有机除脂材料（比如：HLB-P），都是通过式净化，但HMR-Lipid可实现彻底的脂质去除。

具体实验过程：

HMR+溶剂效应消除器结合UPLC-MS/MS检测牛羊奶中有机磷农药残留

摘要:目的 建立通过式固相萃取净化前处理技术快速测定牛羊奶中敌敌畏、敌百虫、倍硫磷、倍硫磷砜、倍硫磷亚砜、氧倍硫磷、倍硫磷氧砜、倍硫磷氧亚砜、辛硫磷、巴胺磷、马拉硫磷、二嗪农、蝇毒磷 13 种常见有机磷农药及其代谢产物残留的液相色谱-串联质谱的检测方法。方法 牛羊奶采用乙腈沉淀蛋白,4 ℃ 离心除脂后经通过式固相萃取柱净化,超高效液相色谱-串联质谱于电喷雾正离子模式和多反应监测扫描模式下进行测定,基质匹配标准曲线外标法定量。结果 13 种目标化合物阴性加标水平在 5、10 和 20 μg/L 下,回收率为 81. 5%~107. 5%,精密度为 1. 24%~6. 23%。13 种目标化合物的检出限为 0. 015~0. 15 μg/L,定量限为 0. 05~0. 50 μg/L。结论 该方法线性相关性良好、检出限低,精密度和准确度均符合要求,可拓展多种类的农药检测,适用牛羊奶及相关制品的日常监测。

1 标准溶液的配制

13 种有机磷标准储备溶液( 1. 0 mg/mL) ：分别精密称取敌敌畏、敌百虫、倍硫磷、倍硫磷砜、倍硫磷亚砜、氧倍硫磷、倍硫磷氧砜、倍硫磷氧亚砜、辛硫磷、 巴胺磷、马拉硫磷、二嗪农、 蝇毒磷各0. 0100 g，置于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度,摇匀,作为标准储备溶液(1. 0 mg/mL)于-20 ℃ 冰箱保存。需要时各取储备液 0. 1 mL置于10 mL 棕色容量瓶中,用乙腈稀释100倍后，配置成10. 0 μg/mL 的混合中间液。使用前将中间液用乙腈稀释配制成0. 1 μg/mL 的混合标准使用液。分别吸取0. 10 μg/mL的13 种有机磷农药混合标准使用液 10、20、50、100、150 和 200 μL,用阴性空白提取溶液定容至1. 0 mL,制备成有机磷农药含量在1. 00、2. 00、5. 00、10. 00、15. 00 和 20. 00 ng/mL 的基质匹配标准曲线。

2 样品预处理方法

准确量取牛奶或羊奶样品 2. 0 mL ( 精确至0. 01 mL)置于 50 mL 离心管中,加入 8 mL乙腈，迅速旋上瓶盖,振荡涡旋1 min,超声提取 30 min，4 ℃ 条件下,10 000 r/min 离心10 min,转移上清液3. 0 mL 过Anavo HMR-Lipid小柱（300 mg/3 mL，货号：AN60F034）。直接收取滤液 1 mL,过 0. 22 μm 滤膜,上机测定。

3 仪器条件

液 相 色 谱 条 件：

溶剂效应消除器：超高压型，货号：AN80C068

色谱柱：Anavo XP C18,1,7μm,2.1*100mm，货号：AN80A006

柱温：40 ℃ 

进样体积：5 μL

流速：0. 350 mL/min。

流动相 A 为甲醇，流动相 B 为 0. 1%甲酸水溶液。 

梯度洗脱,条件如下：0 ~ 6. 0 min,20% ~ 100% A;6. 0 ~ 8. 5min,100% A;8. 5 ~ 8. 6 min,100% ~ 20% A;8. 6 ~10. 0 min,20% A。

质谱条件：

 电离方式: 电喷雾正离子模式,多反应监测模式( multiple reaction monitoring，MRM) 采 集, 毛 细 管 电 压 3. 0 kV, 离 子 源 温 度150 ℃ , 脱 溶 剂 温 度 500 ℃ , 脱 溶 剂 气 流 量1000 L/h, 锥 孔 气 流 量 150 L/h, 碰 撞 室 压 力0. 33 Pa。其他质谱条件见表 1。

4 方法的准确度和精密度

农药残留限量标准 GB 2763—2021《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中,有机磷农药在生乳中的残留限量为10 ~ 20 μg/kg,本研究以最低残留限量 10 μg/kg为依据,设定加标浓度水平为 0. 5倍限量值、1 倍限量值和 2 倍限量值,添加浓度水平在 5、10、20 μ /L下,采用样品预处理方法进行试验。13 种有机磷农药的回收率在81. 5% ~ 107. 5%, 相对标准偏差在 1. 24% ~6. 23%。详细结果见表 2。加标回收实验结果表明本方法的精密度和准确度基本良好,符合 GB/T 27404—2008 实验室质量控制规范食品理化检测与欧盟 2002 / 657 / EC 对残留检测方法的规定。

5 方法的线性范围和检出限

为了更好地降低基质效应的干扰,本研究采用基质匹配标准溶液进行线性实验。各离子对的峰面积对其质量浓度绘制标准曲线, 以 y 轴峰响应 信 号 为 纵 坐 标, x 轴提取液中农残浓度(ng/mL)为横坐标,制定标准回归方程,13 种有机磷农药的线性回归方程的相关系数( r2)均大于0. 99,同时采用空白基质加标并逐步降低目标物浓度的方式,按信噪比( S/N) >3 确定方法的检出限( limit of detection, LOD) ,按信噪比( S N) > 10确定方法的定量限 ( limit of quantitation, LOQ) ,13 种有机磷农药的各化合物的检出限在 0. 015 ~0. 150 μg/L,定量限在 0. 05 ~ 0. 50 μg/L。具体结果见表 3。

6 谱图

化合物：蝇毒磷;马拉硫磷;倍硫磷砜;二嗪农;辛硫磷;倍硫磷亚砜;倍硫磷氧砜;巴胺磷;倍硫磷;倍硫磷氧亚砜;氧倍硫磷;敌百虫;敌敌畏

 未使用( A)和使用(B)溶剂效应消除装置对 13 种有机磷农药色谱峰形的改善作用(进样量 5 μL)