让你头疼的不是酒而是它——组胺！Anavo助力红酒中生物胺的测定

让你头疼的不是酒而是它

有时候喝完酒会有头疼的感觉，于是怀疑自己喝的是劣酒。

其实引发头疼或偏头痛甚至其它过敏反应的罪魁祸首是葡萄酒中的组胺。

组胺是广泛存在于动植物体内的一种生物胺，存在于许多经过发酵的食品中。

摄入过多的组胺会引起过敏反应，对神经系统、血管扩张等产生一定的作用，导致生物体出现头疼、心慌、腹泻、腹部抽搐和呼吸紊乱等一系列不良症状，也影响人的荷尔蒙分泌、记忆、食欲等功能。

澳大利亚和瑞士规定葡萄酒中的组胺含量不得高于10 mg/L，法国规定不得高于8 mg/L，荷兰规定不得高于3.5 mg/L，而德国更加严格，规定不得高于2 mg/L。但我国葡萄酒中组胺的Z 高含量可达10.51mg/L。

Anavo助力红酒中生物胺的测定

助力食品安全和美好生活，纳鸥科技采用经优化的Anavo QuEChERS混合填料净化红酒样品后，超高效液相色谱-串联质谱法经色谱柱分离，可同时检测红酒中组胺、酪胺、色胺和苯乙胺4种生物胺。4种目标化合物的检出限为1.0 μg/L, 定量限为3.0 μg/L。4种化合物的回收率范围为94.7%~106.7%, 相对标准偏差为3.7%~8.1%。

该方法简单、快速、结果准确、灵敏度高, 适合测定红酒中组胺、酪胺、色胺和苯乙胺4种生物胺。

检测痛点

目前测定食品中生物胺的标准GB 5009.208-2016，采用高效液相色谱法，经液液萃取净化，柱前或柱后衍生的方法进行检测, 但由于食品基质复杂, 衍生化效率无法保证, 且检测步骤非常的繁琐、不环保。

Anavo方法优势

纳鸥科技采用一种优化的Anavo QuEChERS混合填料净化（货号:AN50D082），亲水色谱柱分离， 质谱法检测红酒中组胺、酪胺、色胺和苯乙胺含量的检测方法,与国标方法相比, 本方法建立的检测方法有机溶剂的使用量少, 提取净化简单易行, 更加环保、安全和高效。

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定红酒中4种生物胺含量

1、溶液配制

标准储备溶液：精确称取标准品各0.0100 g, 分别用水溶解并定容至10 mL, 浓度为1000 mg/L, 1~4 ℃冰箱中保存。

混合标准使用液：用乙腈和水混合液(8.5:1.5, V:V)将标准储备溶液稀释配制为浓度1.0 mg/L的混合标准使用液, 1~4 ℃冰箱中保存。

2、样品前处理

吸取250 μL红酒样品, 用乙腈水溶液(8.5:1.5, V:V)稀释定容至5 mL容量瓶中, 取2 mL于Anavo QuEChERS净化管中（50 mg C18，50 mg PSA，15 mL 货号：AN50D082）, 超声净化5 min, 5000 r/min离心10 min, 过0.22 μm尼龙滤膜后经超高效液相色谱串联质谱仪分析。

前处理方法的优化

目前常用的吸附剂包括石墨化炭黑(GCB)、丙基乙二胺(PSA)和十八烷基硅烷(C18)。

石墨化炭黑对芳香胺类化合物具有明显的吸附作用, PSA主要吸附有机酸和极性小分子化合物杂质, C18能够吸收脂类、色素和香气成分等杂质,

所以本方法选择了2种吸附剂(C18、PSA)的混合填料净化红酒样品基质, 采用在基质中添加目标组分的方法, 计算吸附剂混合填料的加标回收率和相对标准偏差。研究结果表明50 mg C18和50 mg PSA混合填料回收率在96.6%~103.1%之间, 净化效果Z 佳。

不同吸附剂混合填料加标回收率实验结果(n=6)

3、仪器条件

(1)液相色谱条件

ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.7 µm), 流动相: 0.1%(V/V)甲酸-15 mmol/L乙酸铵水溶液(B1)-乙腈(A1), 流速: 0.3 mL/min, 进样体积: 2 μL, 柱温: 35 ℃。液相色谱梯度洗脱程序: 0~4.0 min, 85% A1; 4.0~4.5 min, 85%~50% A1; 4.5~6.0 min; 50% A1; 6.0~6.5 min; 50%~85% A1; 6.5~8.0 min; 85% A1。

(2)质谱条件

离子源: 电喷雾电离ESI(+); 毛细管电压:3.5 kV; 碰撞气: 氩气; 脱溶剂气温度: 500 ℃; 脱溶剂气流量: 1000 L/h; 扫描模式: 多反应监测模式(multiple reaction monitoring, MRM)。

4种生物胺质谱参数优化结果

注: *为定量离子

4、方法的线性范围及检出限

按照各目标组分的质谱响应特性, 配制混合标准溶液系列, 在优化后的色谱和串联质谱条件下进行测定, 以各待测物的色谱峰面积对其在溶液中的含量进行线性拟合, 相关系数(r2)均大于0.995, 以信噪比为3(S/N=3)计算检出限(limit of detection, LOD)为1.0 μg/L, 信噪比为10(S/N=10)计算定量限(limit of quantitation, LOQ)为3.0 μg/L, 见下表。

4种生物胺的标准曲线及检出限

5、方法的回收率与精密度

取葡萄酒样品, 在优化后的实验条件下, 分别添加3个浓度水平的4种生物胺标准工作液, 按照1.2.2的条件进行提取和检测, 每个加标浓度平行测定6次, 计算平均加标回收率和相对标准偏差, 结果见表4。组胺、酪胺、色胺和苯乙胺的平均回收率为94.7%~106.7%, 相对标准偏差为3.7%~8.1%。

加标回收率实验结果(n=6)

6、谱图

如果您样品前处理方法，目前商品化的产品无法满足您需求，纳鸥科技可以提供QuEChERS和SPE各种填料定制化需求，欢迎各位老师与纳鸥科技联系。