GB 31656.11-2021前处理关键点和要点 水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定

 一法 高效液相色谱（替代GB/T 22961-2008）

原理

试样中土霉素、四环素、金霉素和多西环素的残留经柠檬酸缓冲溶液提取，固相萃取柱净化，液相色谱荧光检测器测定，外标法定量。

8.1 提取 取试料5 g（准确至±0.02 g），加柠檬酸缓冲液20 mL，涡旋震荡2min，超声10 min， 6000 r/min离心10 min，取上清液，残渣加柠檬酸缓冲液10 mL，重复提取两次，合并三次上清液，待净化。

关键词：GB 31656.11-2021与GB/T 22961-2008在提取过程中的区别

要点：

• 与GB/T 22961-2008相比，GB 31656.11-2021的提取次数为3次，同时去掉了正己烷脱脂的步骤。

8.2 净化 固相萃取柱依次用甲醇10 mL、水10 mL、柠檬酸缓冲液5 mL活化，取备用液过柱，用甲醇溶液10 mL、水10 mL淋洗，抽干，加甲醇10 mL，洗脱，收集洗脱液，40℃氮气吹干， 残渣加磷酸二氢钾溶液1.0 mL使溶解，超声1min，0.22 μm水相滤膜滤过，供高效液相色谱测定。

关键词：GB 31656.11-2021与GB/T 22961-2008在净化过程中的区别

要点：

• 在净化步骤方面，GB 31656.11-2021的SPE净化的步骤更简单了，GB/T 22961-2008是需要用两种不同类型的SPE柱，先后进行净化，新的标准去掉了阳离子交换净化步骤。只保留了HLB的净化。

• 另外，在HLB的洗脱液也有差异，在GB/T 22961是用乙酸乙酯做洗脱液，新国标的洗脱液直接用甲醇。

 二法 液相色谱-串联质谱法

原理

试样中土霉素、四环素、金霉素和多西环素的残留用 Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液提取，醋酸铅沉淀，正己烷除脂，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。

18.1 提取 取试料2 g（准确至±0.02 g），加Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液6 mL、醋酸铅溶液2 mL， 涡旋混合1 min，超声10 min，4℃以8000 r/min离心5 min，取上清液。残渣分别用Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液5 mL，重复提取两次，合并3次提取液。

18.2 净化 向上述提取液加正己烷10 mL，涡旋1 min，8000 r/min离心5min，取下层溶液，加Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液至20.0 mL，备用（鳗鲡、蟹和海参样品，需按照上述方法净化两次）取固相萃取柱依次用甲醇、水各5 mL活化，取备用液10.0 mL过柱，控制流速约1 mL/min， 用水、甲醇溶液各5 mL淋洗萃取柱，弃去流出液，减压抽干5 min。加甲醇-乙酸乙酯5 mL洗脱，收集洗脱液，40 ℃氮气吹至近干，加甲酸溶液（0.1%）-乙腈1.0 mL溶解残渣，涡旋混匀, 滤过，为防药物变性，需及时供液相色谱-质谱仪测定。