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干货分享 | 蛋白样本提取的关键在哪儿?
发布:安倍医疗器械贸易(上海)有限公司浏览次数:3464蛋白提取 蛋白质是生命活动的物质基础,是构成细胞的大分子有机化合物,同时也是生命活动的主要承担者。在人体内,蛋白质发挥着各种生理作用。蛋白酶能催化体内物质的代谢;蛋白类激素调节各种生理过程,维持人体内环境的稳态;抗体蛋白抵御外界病原体的感染;细胞因子可以调节细胞生长、免疫应答、参与炎症反应、诱导创伤愈合等。 对于蛋白质的研究手段,除了检测蛋白质互作的Pull-Down和Co-IP,以及经典的Western Blot、Elisa等。近些年,随着科技的发展,蛋白质组学的兴起,也为蛋白的研究提供了新思路。
蛋白样品制备是以上实验的第一步,也是至关重要的一步。只有将样品充分的裂解,才能得到更加可靠的结果。传统的样本前处理,对于不同的样本,需要采用不同的裂解方法。并且单次裂解时间长,通量低,严重影响实验效率。对于一些困难样本,在短时间内很难充分破碎。
蛋白质提取难点 蛋白质对温度敏感,长时间地破碎样本会急速升温,蛋白质极易降解。
样本破碎不充分,细胞内的蛋白质无法充分释放。
传统的超声以及高压破碎通量低,耗时久。
很难处理植物根、茎、酵母、孢子、肿瘤组织等困难样本。
FastPrep-24? 5G仪器 MP的FastPrep-24? 5G快速样品制备仪采用独特的8字三维运动,3向剪切力—水平运动产生机械剪切力(切碎)、垂直运动产生级联效应(裂解珠碰撞)、高速震荡产生液体涡流剪切(微流体层分离),高效裂解各种样本。Z大速度可达10 m/s,可在短短40 s内充分裂解各种困难样本。单次可裂解24个样本(2 mL),额外增配适配器单次Z多可裂解48个样本(2 mL)。
CoolPrep?冷冻适配器 MP Bio
搭配冷冻适配器,可在低温条件下裂解样本。样品在裂解时研磨珠剧烈震动碰撞,热量从裂解管内部产生。CoolPrep?冷冻适配器采用干冰制冷,使用便捷,可高效冷却研磨体系。有效防止对温度敏感的生物大分子降解。
FastPrep?仪器家族提取案例 下面请看用FastPrep?仪器家族提取蛋白的实际案例:
01 案例一 样本:绿柠檬、黄柠檬、橙子、柚子(柑橘类) 研究目的:分离鉴定柑橘过敏原的研磨方法 仪器:Fastprep-24? 5G仪器、CoolPrep?冷冻适配器、Lysis Matrix A/C/E、I品牌均质仪 提取结果: 结论: 使用FastPrep-24? 5G快速样品制备仪从柑橘果皮和果肉样品中提取蛋白质,3款裂解介质提取效果优异。使用I品牌的研磨仪提取的蛋白质得率很低,果胶浓度高,阻碍了蛋白在SDS-PAGE凝胶上的迁移。 02
案例二
样本:花粉(桦树、荨麻、墙草、松树)
研究目的:从花粉颗粒中提取蛋白质过敏原的快速方法
仪器:Fastprep-24? 5G仪器、CoolPrep?冷冻适配器、2 mL Lysis Matrix C/E
提取结果:
使用FastPrep-24? 5G快速样品制备仪进行样本前处理,Z终可提取至多2 mg/mL的蛋白质。用FastPrep-24? 5G快速样品制备仪与标准方式分别从不同植物的花粉中提取蛋白质。使用4个不同批次的花粉进行重复实验4次,蛋白浓度采用Bradford方法进行定量分析。
蓝色- FastPrep-24? 5G /灰色-标准法
03
案例三
样本:人皮肤活检样本 研究目的:从皮肤样本中提取RNA和蛋白质 仪器:Fastprep-24? 5G仪器、CoolPrep?冷冻适配器、Lysing Matrix D 提取结果: 使用FastPrep-24? 5G快速样品制备仪进行样本前处理,从皮肤样本中快速提取RNA,使用RNA2100生物分析仪分析结果: 使用FastPrep-24? 5G快速样品制备仪进行样本前处理,从活检样品提取蛋白Western Blot分析及定量,下图使用鼠抗GADD 45探针进行检测: 使用FastPrep?样品制备仪获得更高的RNA和蛋白质产量: MP Bio相关产品清单 往期回顾
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