推荐PCR反应体系
反应程序
2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye)是即用型2× 预混合溶液,包含Hieff Canace® AdvanceFast High-Fidelity DNA Polymerase,dNTPs以及优化的缓冲体系,预混液中含有预先添加的电泳指示剂,PCR产物可直接进行电泳,扩增产物为平末端。2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye)具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,反应体系只需加入引物和模板即可。另外,该产品还含有特异保护剂,使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。
产品信息
货号 | 10164ES01/10164ES03/10164ES08 |
规格 | 250 μL/1 mL/5×1 mL |
储存条件
-25~-15℃保存,有效期1年。
使用说明
组分 | 体积 (μL) | 终浓度 |
2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye)* | 25 | 1× |
模板** | x | - |
正向引物F(10 μM)*** | 2 | 0.4 μM |
反向引物R(10 μM) | 2 | 0.4 μM |
ddH2O | Up to 50 | - |
表1 PCR反应体系
*在1× 预混液含有2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。
**推荐范围10-200 ng;cDNA样本上样量范围不超过反应体系的1/10,推荐1-2.5 μL。
***PCR 反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM,推荐0.4 μM。
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 30 sec | 1 |
变性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火* | 60℃ | 5 sec | |
延伸** | 72℃ | 5-10 sec/kb | |
终延伸 | 72℃ | 2 min | 1 |
表2 PCR反应程序
*推荐温度:60°C,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的zui适温度。推荐退火时间设置为5 sec,可以在5-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
**延伸时间:推荐5 sec/kb,也可根据需要,适当延长至10 sec/kb。
注意事项
1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.本产品仅作科研用途!
Ver.CN20230707
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仪企号
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
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