提取:
(1) 取1.0 g样品与3 mL、5 mL甲醇—1%三(1:1)混合,振荡3 min,超声提取10 min,6000 rpm下离心2 min,收集上清液;
(2) 将下层残留物用5 mL甲醇—1%三(1:1)按照步骤(1)重复提取一次,合并两次上清液,待净化。
净化: ProElut PXC 150 mg/6 mL(Cat.#68204)
a活 化:5 mL甲醇、5 mL 0.2%甲酸水;
b上 样:加入待净化液,弃去流出液;
c淋 洗:依次加入5 mL水,5 mL 5%氨水水溶液,5 mL 0.2%甲酸水,5 mL甲醇,弃去流出液;
d洗 脱:加入5 mL10%氨水甲醇,收集流出液; e重新溶解:将洗脱液在45 ℃下氮吹至1 mL以下,用70%乙腈水溶液定容至1 mL,过0.22 μm微孔滤膜,供LC-MS分析。
UPLC 条件:
色谱柱:Inspie HILIC,100×2.1 mm,3 μm (Cat#:81412)
流 速:0.5 mL/min
进样量:5 μL
柱 温:35 ℃
流动相: A:5 mmol/mL乙酸铵+0.1%甲酸 B:乙腈
MS条件:
离子源:电喷雾离子源
扫描方式:正离子扫描
检测模式:多反应监测
电喷雾电压:5500 V 雾化气压力:50 psi 辅助气压力:50 psi 气帘气压力:20 psi
离子源温度:500 ℃ 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
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