【概述】
低分子量有机酸是一类广泛存在于自然界的有机物,很多样品基体中都已测出不同种类不同含量的有机酸。目前常用测定方法有 HPLC 法、 IC 法和衍生化 GC 方法。HPLC法分析有机酸时,通常在常规反相色谱柱上保留较弱,本文采用新型复合模式色谱柱,建立了3种有机酸的液相色谱分析方法,可得到良好的分析结果。色谱峰面积精密度(RSD)范围(2.17%~3.29%),标准曲线线性关系良好R2>0.999.本方法流动相条件简单,重复性好,可用于药品、食品中有机酸的检测。
【实验/设备条件】
2.1.3 乙腈(色谱纯,美国Thermo Fisher公司);实验用水为Thermo去离子水;磷酸二氢钠(色谱纯,百灵威公司)
2.1.4甲酸 、乙酸 、三氟乙酸 (色谱纯 ,SIGMASIGMA)
2.3色谱条件
色谱柱:Thermo Acclaim Mixed-Mode WAX-1 (150×3.0mm 3μm)
柱温:30 ℃;
进样量:5 μL;
流动相:A为25mM磷酸二氢钠(氢氧化钠调节pH至5.2),B为乙腈
A:B=60 60:40
检测 波长: 210nm
【样品提取】
称取多肽药物样品 20mg于 10mL 具塞比色管中,加水至 10mL,超声提取 20min,取适量样品在 10000rpm 下高速离心 15min,取上清液过 0.45μm的滤膜后作为待测溶液。
【实验/操作方法】
灵敏度和线性范围测试
采用上述仪器分析方法,对3种有机酸 进行线性范围测试,线性相关系数 r2均大于 0.990.999,线性关系良好。 3种 有机酸线性范围 、线性相关系数 、LODLOD(S/N>3 3)及 LOQLOQ(S/N>10) 结果见表 2,化合物线性方程图见图1。
【实验结果/结论】
本文建立了液相色谱方法结合新型复合模式色谱柱对3种有机酸的检测方法。由实验结果可以看出,基于Thermo Fisher UltiMate 3000 GX液相色谱仪结合Acclaim® Mixed-Mode WAX-1 色谱柱的检测方法具有优异的灵敏度、稳定性和线性范围,可用于有机酸在制药和食品领域的常规分析检测。
【仪器/耗材清单】
2.1.1 Thermo Fisher UltiMate 3000 液相色谱仪
2.1.2 Thermo Fisher UltiMate 3000 RS Diode Array Detector
HPLC方法的典型运行时间大约为20 min,并且有些方法还需要使用氯化溶剂利用UPC2技术,可在3 min
与其它现有的HILIC方法相比,CORTECSUPLC HILIC色谱柱能针对百草枯和敌草快提供更好的保留时
分析时间缩短约四倍,从而提高了常规样品分析的通量溶剂使用量与进样量降低约两倍可在HPLC仪器压力限值内(小于
CORTECS 2.7 m色谱柱由实心核颗粒以Zyou方式装填,设计用于GX高扩展性及高耐受性这其中也包括在
CORTECS C18 + 色谱柱利用低pH低离子强度的pH改性剂(比如甲酸),为碱性化合物分析提供优异的峰
在本次研究中,利用混合模式固相萃取(SPE)和表面带有少量正电荷的GX实心核颗粒色谱柱,在消除干扰的同时提高
作为高纯硅胶高品质的经典色谱柱代表,Symmetry®与SymmetryShieldTM色谱柱已经成
有相当多以前难分离的化合物如水溶性维生素丙烯酰胺糖类核苷磷酸盐等,用ACQUITY UPLC BEH Ami
本实验采用配有PDA和QDa质谱检测器的Alliance HPLC系统,利用CORTECS C18+, 2.