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蛋白质定量测定的方法有哪些

晴涼卟腐 2009-10-31 07:30:02 651  浏览
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参与评论

全部评论(2条)

  • 爱陷入你的温柔 2009-11-01 00:00:00
    通过测氮含量推算其含量的,比如凯氏定氮法。 还有就是通过测定蛋白质中某些基团来推算的,比如说考马斯亮蓝法,据说近年来这种方法很流行诶。。还有比较广泛的,福林-酚法、双缩脲法和紫外分光光度法。

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  • 疯狗图片 2012-11-01 00:00:00
    定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。考马斯亮蓝法(Bradford法)。 凯氏定氮 灵敏度低,适用于0.2~ 1.0mg氮,误差为 ±2% 费时 8~10小时 将蛋白氮转化为氨,用酸吸收后滴定 非蛋白氮(可用三沉淀蛋白质而分离) 用于标准蛋白质含量的准确测定;干扰少;费时太长 双缩脲法(Biuret法) 灵敏度低 1~20mg 中速 20~30分钟 多肽键+碱性Cu2+®紫色络合物 硫酸铵;Tris缓冲液;某些氨基酸 用于快速测定,但不太灵敏;不同蛋白质显色相似 紫外吸收法 较为灵敏 50~100mg 快速 5~10分钟 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收 各种嘌吟和嘧啶; Folin-酚试剂法(Lowry法) 灵敏度高 ~5mg 慢速 40~60分钟 双缩脲反应;磷钼酸-磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原 硫酸铵;Tris缓冲液;甘氨酸; 各种硫醇 耗费时间长;操作要严格计时;颜色深浅随不同蛋白质变化 考马斯亮蓝法(Bradford法) 灵敏度Z高 1~5mg 快速5~15分钟 考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时,其lmax由465nm变为595nm 强碱性缓冲液; SDS Z好的方法;干扰物质少;颜色稳定; 颜色深浅随不同蛋白质变化

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