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- 墩烙肇偈鹤坝 2017-04-18 00:00:00
- 能不能对细菌这样的微生物进行基因测序 基因组DNA测序文库构建 1. 对收到的DNA样品进行检测,取2-3ul样品,用1%的琼脂糖胶检测,对于纯度不够(含RNA或蛋白)的DNA样品需要柱纯化后重新检测。 对于细菌基因组需要扩增16S全长序列,进行验证。 对于噬菌体或者质粒样品,若用16S全长引物扩增,无目的条带则无细菌基因组污染,若出现目的条带则存在污染,需要去除后建库。 2. 用Qubit检测DNA样品浓度。 3. 吸取部分DNA样品,用TE或Elution Buffer稀释,终浓度在10ng/ul-30ng/ul之间,体积为130ul。用Covaris破碎,破碎时请根据需要片段大小,按标准操作流程操作。 4. 样品足够多的情况下,可以取适量破碎后的产物进行PAGE 胶或者琼脂糖胶检测。 5. 对破碎后的产物进行柱式法(5倍体积的B3+100-200ul异丙醇)浓缩回收,加入50-100ul TE或Elution Buffer洗脱。回收产物用Qubit测值。 6. 修平和磷酸化
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