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和注意事项细胞复苏如何进行,有哪些需要注意的事

8886886y 2017-04-28 14:39:44 495  浏览
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全部评论(1条)

  • falubna 2017-04-29 00:00:00
    一、\x09复苏 1.\x09把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动.液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里. 2.\x09把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟. 3.\x09把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来.吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布. 4.\x09标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基. 5.\x093天换一次培养基. 二、\x09传代 1.\x09培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代. 2.\x09把原有培养基吸掉. 3.\x09加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟. 4.\x09细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化. 5.\x09用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来. 6.\x09把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟. 7.\x09倒掉上清液,加1-2ml培养基,把细胞都吹起来. 8.\x09根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中.一般,癌细胞分5个,正常细胞传3个.继续培养. 三、\x09 冻存 把细胞消化下来并离心(同上).用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期.4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存. 冻存液的配制:70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,边滴边摇. 要注意的就是无菌操作!

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  1、务必使用带可靠接地的电源插座为仪器供电,测试过程中油杯及其附近有高热,禁止触碰!

  2、测试过程中必须有人值守,测试完毕如有样品燃烧及时用油杯盖盖住油杯,油杯盖有高热,禁止触碰!

  3、禁止用手扳动点火划扫杆,否则将造成仪器*损坏

  4、仪器有点火装置,**在通风厨内操作(不要开风机),防止外部气流造成测试误差。

  5、温度传感器由玻璃制成,使用时不要与其它物品相碰。

  6、每次换样品,都应将开口杯清洗干净,开口杯与加热器之间不应有其它物品间隔,以便保持良好的导热。

  7、测试头切勿用手或其它物品去压、抬,点火杆不要用手去推拉,以免造成机械损伤。


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  玻璃培养皿/塑料培养皿,本生(天津)健康科技有限公司供应:移液器吸嘴,ELISA试剂盒,动物血清,全系荧光定量PCR耗材,产品包括:PCR单管、八联管、96孔板、384孔板。

  培养皿简介:

  培养皿是一种常用的玻璃仪器,主要用于微生物或细胞培养的一种器皿,由一个平面圆盘状的底和一个盖组成,一般用玻璃或塑料制成。玻璃培养皿可以用于植物材料、微生物培养和动物细胞的贴壁培养也可能用到。塑料的一般是聚乙烯材料的,有一次性的和多次使用的,适合实验室接种、划线、分离细菌的操作,可以用于植物材料的培养。

  培养皿常用规格:60mm、75mm、90mm、100mm、120mm、150mm

  培养皿使用注意事项:

  培养皿质地脆弱、易碎,故在清洗及拿放时应小心谨慎、轻拿轻放。使用完毕的培养皿及时清洗干净,存放在安全、固定的位置,防止损坏、摔坏。

  培养皿用途:

  主要用于盛载液体培养液或固体琼脂培养液进行细胞培养的玻璃或塑料圆形器皿。

  主要适用于防疫站、医院、生物制品、食品工业、制药工业等单位,用于细菌的分离培养、抗菌素效价检验和定性检验分析。在农业、水产等科学研究用于对种子发牙、植物、昆虫、鱼种的人工培养、孵化研究。电子工业或其它行业作为器皿使用。

  当然比较严谨的操作就是一只手(通常是左手)打开培养皿的盖子,打一个角度就可以,然后用无菌长吸管将培养液吸走,然后再换一根习惯加入新鲜的培养基,加的的时候尽量不对着细胞直吹,对着皿的侧壁吹,使之流入培养皿.离酒精灯近点当然好,但也别太近了,塑料的容易遇热变形.

  其实在我看来真的不需要那么严谨,我就是打开盖子然后直接把培养皿反过来把培养液倒入废液缸,也没有污染嘛.无论是换液还是别的操作,重点就是手尽量不要碰任何瓶、皿的口,尽量离远点.我本人就是先一只手掀盖,一只手把皿夹起来,然后托底翻过来,把旧培养液倒出去就可以加新的或者用D-Hanks洗一洗了.

  当然条件好的话(比如有钱买各种无菌长吸管)当然严谨点好,我觉得只要不碰瓶口,尽量不在敞口的时候手从瓶子上面经过就OK.

  关于细胞铺匀,我铺293t

  我的方法是消化,消化好,直接加进去,让他覆盖底面积就好不要晃

  方法:

  1,先在空班里加入培养基润一下,然后加入细胞

  2,直接加入细胞,然后在班里吹吹

  3,加入细胞,晃上下左右,突然停

  方法度应该可行,但不同的人感觉不同,所以最终结果也不同。

  细胞培养皿的用途和注意事项!我司由具有行业背景和丰富市场经验的业人士组成,于为生命科学研究域提供产品,为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求,也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作,共创美好的未来。

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