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- fsq9264543 2017-12-15 13:55:15
- 临床ELISA测定现通常为采用手工操作的以微孔板条为固相的测定模式，测定操作非常简单，一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。现分述如下。 一.临床标本的收集和保存 用于ELISA测定的临床标本Z为常用的是血清（浆），有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和ZL药物等。对用于激素和ZL药物测定的血清标本的收集，要注意收集时间甚或体位有可能会对测定结果产生影响。如可的松在早晨4～6点之间，会有一峰值出现：生长激素、促黄体激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以阵发性方式释放，因此，在测定此类激素时，有必要在密切相连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明显。再如ZL药物的检测，应根据药代动力学选择服药后的Z适时间抽血检测。用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的收集则没有时间和体位方面的影响，只是在处理和保存方面要考虑以下几个方面： （1）要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。 （2）样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。 （3）血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在-70℃以下。 （4）冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。 （5）标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。 二、试剂准备 在临床实验室，对试剂准备一般不太注意，通常的做法是，在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在ELISA测定中试剂的准备Z为关键的是，在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定，以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。其次，目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制，因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。此外，当试剂盒以OPD为底物时，则底物溶液应在反应显色前临时配制。 三、加血清样本及反应试剂 在现在的ELISA商品试剂盒中，血清样本的加入几乎是唯yi的要使用微量加样器加入样本的步骤。使用微量加样器加样必须注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加入在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。 四、温育 温育是ELISA测定中影响测定成败Z为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。Z为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。 温育这一步是临床ELISA测定中Z容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟～1小时，进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1～2小时才能有较完全的结合，低于1小时，可能会影响测定下限。因此，关于温育，在实际测定操作中一定要注意以下几点： （1）要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说，加完样本和/或反应试剂后，将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时，孔内温度从室温升至37℃，需要一定的时间，尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下，这段升温时间可能还比较长，而在临床实验室中，很少有人注意这个问题，通常是将微孔板一放入温箱即开始计时，这样就很容易造成实际测定中温育时间不够，弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题，就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间，在做HBsAg测定的室内质控中，测定由卫生部临床检验ZX供应的1 ng/ml弱阳性样本时，总是测不出来，不知原因为何？这可能就与南方冬天室内温度较低有关，此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够，以致弱阳性样本测定为阴性。因此，为保证37℃下足够的温育时间，临床实验室可自行确定本实验室不同季节（不同室温下）微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃，从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。 （2）温育温度的选择。在有的ELISA试剂盒的说明书中，指出温育温度可有两种，例如，一种是37℃下1小时，另一种则为43℃下45分钟。从免疫测定的抗原抗体反应的本质来看，在较低的温度下反应较长的时间Z为完全。如2～8℃下反应24小时。较高的反应温度，由于分子运动的加怜惜，反应时间缩短，这一点对分子含量较多的强阳性样本的测定没有问题，但对分子含量少的弱阳性样本则有漏检的可能。因此，我们建议在临床ELISA测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。 （3）“边缘效应”的排除。以前在使用96孔板的ELISA测定中，常发现有“边缘效应”，即外周孔显色较ZX孔深，产生这种“边缘效应”的原因可能为96孔板周孔与ZX孔表面或热力学特征的不同。但有研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与ZX孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。 总而言之，在临床ELISA测定中，要保证好的测定效果，可采用下述简单办法来确保温育条件，即尽量采用水浴，温育中让微孔板浮于水面上，或将浸透水的沙布放入一大饭盒中成一湿盒，放于温箱中，这样就会因为板条孔底部直接与37℃水或湿布的接触，以及水浴箱或湿盒内的高温度，而使反应溶液的温度迅速与温室平衡。 五、洗板 固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来，以保证ELISA测定的特异性。因此，洗板对于ELISA测定来说，也是极其关键的一步。以HRP作为标记酶的ELISA试剂盒中使用的洗板液一般为含0.05%Tween20的中性PBS，Tween20为一种非离子去垢剂，既含亲水基团，也含疏水基团，其在洗涤中的作用机理是，借助其疏水基团与经疏水性相互作用被动吸附于聚苯乙烯固相上蛋白的疏水基团形成疏水键，从而削弱蛋白与固相的吸附，同时在其亲水基团与液相中水分子的结合作用下，促使蛋白质脱离固相而进入液相，这样就可达到去掉非特异吸附物的目的，但由于抗体或抗原的包被通常也是通过在碱性条件下与固相的疏水性相互作用而被动吸附于固相，因此要注意非离子去垢剂的使用浓度，洗板液中Tween20浓度高于0.2%，可使包被于固相上的抗原或抗体解吸附而影响试验的测定下限。 在临床实验室中，ELISA测定的洗板一般有两种方式，即手工和洗板机洗板。手工洗板即是在每次反应温育后，将反应液吸出或甩干，然后在板孔中加满洗液，放置2～3分钟后，将洗液吸出或甩干，再在吸水纸上拍干。重复上述洗涤步骤3～4次，Z后在吸水纸上拍干，即可进行下一步测定操作。洗板机洗板则是将上述手工操作改由洗板机进行，使用洗板机洗板的一个特点是，每次洗板后不能拍干，故有较多的液体残留，液体残留量小的洗板机洗板至彻底所需的次数要少于残留量大的洗板机。在特定临床实验室所使用的洗板机，到底洗多少次能达到要求，可进行下面这个简单的实验：选择4×8 HBsAgELISA包被板条，每2×8孔分别加入相同一份弱阳性和一份阴性样本，按试剂盒说明加入酶结合物并完成温育后，洗板孔时按diyi排4孔洗1次、第二批4孔洗2次、第3排4孔洗3次——直至第8排4孔洗8次，加底物显色测定，如洗3次后，显色不再改变，即洗3次的板孔比色测定与4次、5次洗板的板孔的吸光度等相同，阳性/阴性值保持Z大不变，则可以认定该实验室所用洗板机3次洗板即可达到要求。 六、显色 在目前的以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中，如以TMB为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以OPD为底物，则试剂盒提供OPD片剂或粉剂，临用前配制。一般商品试剂盒显色反应条件为37℃或室温反应15～30分钟。从理论上说，37℃30分钟才可以使HRP的底物催化反应完全，尽管在Z初的10分钟内，绝大部份催化反应即可完成。因此，为使弱阳性样本孔能有充分的显色，建议在37℃下反应25～30分钟后，终止反应比色测定。 此外，在加入底物开始显色反应前，Z好是先检查一下底物溶液的有效性，即可将A和B两种液各加一滴于清洁的空板孔或eppendorf管中，观察是否有显色出现，如有，则说明底物已变质。以OPD为底物，配好后应为无色，否则就不能使用。以TMB为底物，整个显色反应过程无需避光，而以OPD为底物，则需避光进行。关于TMB和OPD的显色反应特点及注意点可参考前面有关章节内容。显色反应完成后，加入酸终止反应，振荡混匀后即可进行下面的比色测定或肉眼判断结果。 七、比色 ELISA的比色测定由酶标仪进行，有的同行可能会认为，既然由酶标仪进行，那么此时便可以万事大吉了，其实不然，因为当代较为先进的酶标仪器仪表，均有较多的功能，使用不当，会得到令人难以理解的结果。如使用酶标仪比色测定后，有许多阴性测定孔的吸光度值为负数或测定假阳性率大大增加等等。这主要是没有正确地理解和使用酶标仪所致。至于如何正确理解和使用酶标仪详见后面有关章节。此处，只是强调下面两点： （1）比色测定时，一定要注意酶标仪的波长是否已调至合适或所用滤光片是否正确。由于有的临床实验室在进行ELISA测定时，以TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用，而前者比色波长为450nm，后者为492nm，滤光片需根据要求随时更换。因此，容易出现滤光片错用的问题。 （2）单波长或双波长比色选择的问题。中档以上的酶标仪基本上都同时具有单波长和双波长比色功能。所谓的单波长比色即是通常的以对显色具有Z大吸收的波长如450nm或492nm进行比色测定；而双波长双色则酶标仪在敏感波长如450nm和非敏感波长如630nm下各测定一次，敏感波上下的吸光度测定值为样本测定酶反应特异显色的吸光度与板孔上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和；非敏感波长下测定即改变波长至一定值，使得样本测定酶反应特异显色的吸光度值为零，此时测得的吸光度即为脏物的吸光度值。Z后酶标仪给出的数值为敏感波长下的吸光度值与非常感波长下的吸光度值的差。因此，双波长比色测定具有能排除由微滴板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光度的影响的优点，一般不必设空白孔。如在使用双波长比色时，仍设空白孔，就可能会造成前面提到的测定孔吸光度为负数的现象。由于ELISA测定中单个空白孔的非特异吸收上有一定程度的不确定性，也就是说每次测定或同次测定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度测定值，故而在ELISA测定比色时，Z好是使用双波长比色。 八、结果判定 临床ELISA测定按其表示测定结果的方式分为定性和定量测定两大类。定性测定只是对标本中是否含有待测抗原或抗体作出“有”或“无”的结论，分别用“阳性”和“阴性”来表示。可见定性测定通常是用于传染性病原体的抗原或抗体的测定，以判断特定病原体感染的存在与否。而定量测定则是对标本中待测抗原的多少进行量值测定，以具体数值表示。定量测定基本上是用于非病原体抗原物质的测定，如激素、细胞因子、肿瘤标志物、小分子药物等。目前国内在临床上应用的ELISA试剂盒绝大部份是用于传染性病原体的抗原或抗体的定性测定，也有少部份用于αFP、hCG、细胞因子等的定量测定。ELISA定性测定的“阳性”和“阳性”的判定依据是试剂盒所确定的阳性判定值（Cut-off）。定量测定的“量值”依据是试剂盒中所带标准品同时测定得出的剂量反应曲线（又称标准曲线）。有关ELISA定性和定量测定结果的数据处理后面将有专门章节讨论。本处只想强调的一点是，ELISA定性测定的“阴性”和“阳性”结果的判定依据只能是试剂盒本身所确定的Cut-off值，而不能以卫生部临床检验ZX供应弱阳性定值质控血清。为什么要强调这一点呢？主要是因为以前有很多基层实验室均使用部ZX供应的弱阳性定值质控血清（以前也称“临界值”血清）的测定吸光度来判定结果，高于其判为阳性，反之为阴性，而不管试剂盒Cut-off值为何。到目前为止，仍有一些实验室在坚持这种错误的做法。试剂盒的Cut-off值的设立是建立在一系列科学试验及统计学研究的基础上的（详见后述），而部ZX供应的弱阳性定值质控血清主要是供临床实验室进行室内质控时使用。 下面再解释一下在ELISA定性测定结果判定中常用的一些缩写。 （1）S/CO：其中S为Sample(样本)或Specimen(标本)的简写，表示的是标本测定的吸光度值，CO为Cut-off值的简写。除竞争YZ法外，其它ELISA定性测定模式中，当S/CO值大于或等于1时，标本的测定为阳性，小于1时为阴性。 （2）S/N或P/N：其中S同（1），N为Negative(阴性对照)的简写，P为Patient（患者）的简写。较早的试剂盒很多都使用S/N或P/N≥2.1为阳性判定标准，现仍有一些试剂盒使用这种方式。这种方式与S/CO方式无根本性区别，只不过是前者将阴性对照（N）的2.1倍视为Cut-off值而已。 九、结果报告及解释 临床ELISA测定结果的报告较为简单。定性测定报阴性或阳性即可；定量测定则报出具体的数值。结果解释比较起来要复杂的多，它要求实验室技术人员对所测定的项目有较为全面的知识基础。例如，对乙肝“两对半”结果的解释，不但要求检验者要知道不同的结果模式的临床意义，而且必须对乙肝病毒的分子生物学、分子的变异及其对表型的影响有更深层次的了解。现在，检验不再是单纯的实验室测定，而已成为一门临床医学学科，即检验医学，这就要求从事医学检验工作的检验医师，对所做的测定项目除了知其然，还要知其所以然，否则就难免为时代所淘汰。 综上所述，尽管ELISA测定的操作步骤非常简单，但有可能会影响测定结果的因素却较多，分布在测定操作的各步之中，尤以加样、温育和洗板为甚。为帮助大家分析查找测定中出现问题的可能原因，特对常见问题及原因归纳总结于下表。 临床ELISA测定中可能会出现的问题及可能的原因 问 题 可能的原因（非试剂盒本身的原因） 1．弱阳性质控样本检测不出 温育的时间或温度不够；显色反应时间太短；所用配制缓冲液的蒸馏水有问题 2．测定的重复性差 （相同样本两次测定结果不一致） 这是典型的由测定操作引起的问题，包括 （1）加样本及试剂量不准；孔间不一致； （2）加样过快，孔间发生污染； （3）加错样本； （4）加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区； （5）不同批号试剂盒中组分混用； （6）温育时间、洗板、显色时间不一致； （7）孔内污染杂物； （8）酶标仪滤光片不正确； （9）血清标本未完全凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出现假阳性反应等。 3．白板 （阳性对照不显色） （1）漏加酶结合物； （2）洗板液配制中出现问题，如量筒不干净，含酶YZ物（如叠氮钠）等。 （3）漏加显色剂A或B； （4）终止剂当显色剂使用。 4．全部板孔均有显色 （1）洗板不干净； （2）显色液变质； （3）加底物的吸光受酶污染； （4）洗板液受酶等污染。 摘自《检验诊断与实验室自动化》2004年第4期
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土壤养分是指土壤提供的植物生长所必需的营养元素。土壤中可被植物根直接吸收或转化后吸收的矿物养分。包括氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、硼、钼、锌、锰、铜、氯等13种元素。
土壤养分其含量因土壤类型和地区而异，主要取决于母质类型、有机质含量和人为因素的影响。其有效性取决于它们的存在。土壤养分的形态是不固定的，其转化包括化学转化、物理化学转化、生化转化等。在天然土壤中，土壤养分主要来自土壤矿物质和土壤有机质，其次是大气降水、坡面渗漏、地表径流和地下水。在耕作土壤中，它也来自施肥和灌溉。土壤养分是作物吸收养分的重要来源之一，占作物吸收养分总量的很大比例。
如何保证土壤充足的养分：
土壤养分状况直接关系到农业的发展，测土配方施肥是一种精细的施肥管理方法，土壤养分检测仪是针对土壤养分的检测，正确针对土壤中缺失哪种养分来进行检测，科学合理的确定施肥的种类、数量、时间以及方法等。一般测土配方施肥主要有土壤测试、肥料配置和科学施肥。做好这几点就能有效的保证土壤充足的养分。
什么是土壤养分检测仪：
土壤养分检测仪是一款集药、器、仪为一体，携带方便，相当于一个小型实验室。适于农业服务部门或农资经销商、肥料厂商测土施肥和鉴别肥料真假。 可检测土壤及化肥、有机肥、植株中的氮、有效磷、钾、全氮、全磷、全钾、有机质含量，土壤酸碱度，含盐量(扩展)，以及土壤钙、镁、硫、硼、氯、硅等6种中微量元素。
保证土壤中的养分不仅能促进农产品的产量，更能提高农业发展的现状，促进农民的收入。在农业生产中，调整土壤养分状况以满足作物不同生长阶段对养分的需求是获得优质高产作物的重要环节。了解土壤养分状况可以为科学施肥、养分分区管理和有效控制农田养分流失提供一定的理论和科学依据。
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土壤养分是指土壤提供的植物生长所必需的营养元素。土壤中可被植物根直接吸收或转化后吸收的矿物养分。包括氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁、硼、钼、锌、锰、铜、氯等13种元素。
土壤养分其含量因土壤类型和地区而异，主要取决于母质类型、有机质含量和人为因素的影响。其有效性取决于它们的存在。土壤养分的形态是不固定的，其转化包括化学转化、物理化学转化、生化转化等。在天然土壤中，土壤养分主要来自土壤矿物质和土壤有机质，其次是大气降水、坡面渗漏、地表径流和地下水。在耕作土壤中，它也来自施肥和灌溉。土壤养分是作物吸收养分的重要来源之一，占作物吸收养分总量的很大比例。
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- 金相显微镜如何进行正确操作？
金相显微镜主要是用来鉴定和分析金属内部结构组织，是金属学研究金相的重要仪器，是工业部门鉴定产品质量的关键设备，专门用于观察金属和矿物等不透明物体金相组织的显微镜。这些不透明物体无法在普通的透射光显微镜中观察，故金相和普通显微镜的主要差别在于前者以反射光，而后者以透射光照明。不仅可以鉴别和分析各种金属、合金材料、非金属物质的组织结构及集成电路、微颗粒、线材、纤维、表面喷涂等的一些表面状况，金相显微镜还可以广泛地应用于电子、化工和仪器仪表行业观察不透明的物质和透明的物质。如金属、陶瓷、集成电路、电子芯片、印刷电路板、液晶板、薄膜、粉末、碳粉、线材、纤维、镀涂层以及其它非金属材在金相显微镜中照明光束从物镜方向射到被观察物体表面，被物面反射后再返回物镜成像。所以用金相显微镜来检验分析金属内部的组织结构在工业生产中是十分重要的。体视显微镜在工业生产中也可以用到，但是它只是用来观察金属表面划伤、划痕等，放大倍数一般在10X-50X之间，金相的放大倍数一般在40X-400X，有些可以达到800X。
金相显微镜的正确使用方法：
1、实验时要把现场金相显微镜放在座前桌面上稍偏左的位置，镜座应距桌沿6～7cm左右。
2、打开光源开关，调节光强到合适大小。
3、转动物镜转换器，使低倍镜头正对载物台上的通光孔。先把镜头调节至距载物台1～2cm左右处，然后用左眼注视目镜内，接着调节聚光器的高度，把孔径光阑调至Z大，使光线通过聚光器入射到镜筒内，这时金相显微镜视野内呈明亮的状态。
4、将所要观察的玻片放在载物台上，使玻片中被观察的部分位于通光孔的正ZY，然后用标本夹夹好载玻片。
5、先用低倍镜观察(物镜10X、目镜10x)。观察之前，先转动粗动调焦手轮，使载物台上升，物镜逐渐接近式样。然后，左眼注视目镜内，同时右眼不要闭合(要养成睁开双眼用金相显微镜进行观察的习惯，以便在观察的同时能用右眼看着绘图)，并转动粗动调焦手轮，使载物台慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。转换不同倍率的物镜观察试片时，要握着物镜转塔的侧缘来转动，不可握着物镜来回转物镜转塔，以免光轴产生偏差。
6、如果在视野内看到的物像不符合实验要求，可慢慢调节载物台移动手柄。调节时应注意玻片移动的方向与视野中看到的物像移动的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以调节微动调焦手轮，直至物像清晰为止。
7、如果进一步使用高倍物镜观察，应在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分移至视野ZY。一般具有正常功能的显微镜，低倍物镜和高倍物镜基本齐焦，在用低倍物镜观察清晰时，换高倍物镜应可以见到物像，但物像不一定很清晰，可以转动微动调焦手轮进行调节。
8、在转换高倍物镜并且看清物像之后，金相显微镜可以根据需要调节孔径光阑的大小或聚光器的高低，使光线符合要求。
9、观察完毕，应先将物镜镜头从通光孔处移开，然后将孔径光阑调至Z大，再将载物台缓缓落下，并检查零件有无损伤。
10、拆目镜及物镜时，要先拆物镜，再拆目镜。金相显微镜装目镜及物镜时恰好相反，要先装目镜，再装物镜。如此可避免灰尘落入金相显微镜中。
（来源:上海西努光学科技有限公司）
- 如何正确进行石材清洗
- 本生教您如何选择ELISA试剂盒的正确步骤
本生教您如何选择ELISA试剂盒的正确步骤
ELISA试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在上得到了广泛的应用，然而实验新手们面对各种各样、动则上上千种的ELISA试剂盒，内心应该是崩溃的。
各种厂家、品牌，各种种属，各种因子，琳琅满目，质量良莠不齐，如何浪里淘金，选择既符合研究需求，又品质上乘的 ELISA 试剂盒呢?
本生技术小编教你几招，一眼“相中”、最合适的那个ELISA试剂盒!
首先，你要明确研究种属：
一般来说，厂家都会在产品名称上标明种属，且为单词，检索种属的常用语言为英文。
如果您需对不同物种的同一因子进行定量，建议优先寻找适用于多个种属的 ELISA 试剂盒，产品介绍中会注明
其次，要明确样本类型：
不同厂家验证样本类型不同，即使同一厂家不同试剂盒，其验证样本类型也不尽相同。特别是复杂的血浆样本，根据样本处理方式的差异，分为 EDTA 血浆、肝素抗凝血浆和柠檬酸盐血浆，因此购买前需仔细核对。
第三步：要会预测自己的目标因子的浓度
一般来说，待测因子可以根据经验或资料获得参考的检测范围，且正常人与疾病状态存在差异。如热门炎症因子 IL-6，正常人血清中浓度为 3.13 pg/mL，病人会显著，CAR-T 回输病人血清中的 IL-6 浓度甚至为正常人的 200 倍以上。
因而，必要时进行样本的稀释及选择合适检测范围的试剂盒极其重要。
若浓度太低，可选择高敏试剂盒;若不确定待测浓度或样本间浓度差异较大，建议使用检测动态范围更宽的化学发光法ELISA试剂盒。
如同样为 IL-6 ELISA 试剂盒，各类型检测范围差异较大，需要根据实际情况选择合适的试剂盒。
第四步：检查试剂盒进行过哪些质控
质控数据在说明书中即可找到，在购买前检查试剂盒是否进行过严格的质控实验，包括批次内(Intra-Assay)及批次间(Inter-Assay)、掺入回收实验、线性稀释实验及交叉反应测试等，每个数据都看一下，确保的结果重现性及准确性。
第五步：确定需检测的因子数量
如果待测因子超过 5 个，且样本量较小时，单因子 ELISA 检测方法并不是选择。
建议考虑多因子检测方法，如固相芯片(样本数量一般 5 个以内，检测指标可达上百个)及 Luminex 液相芯片方法 (检测样本多达 80 个，检测指标多达 50 个)或微流控 ELISA 检测系统 Ella。
可节约样本及时间成本，也可保证检测结果准确。
第六步：预算评估
预算往往是大家优先考虑的，实际上，不能够一味讲究产品价格，更需要考虑性价比。生物学是极其严谨的科学，一致性的实验结果是基金、文章等评审过程中的因素，即使低廉的价格，不能够重现结果，也是资源的另一种浪费。
本生ELISA检测 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。
- 本生阐述：Elisa试剂盒的温育如何进行？
本生阐述：Elisa试剂盒的温育如何进行？
Elisa试剂盒的操作因固相载体的形成不同而有所差异，良好的仪器和正确的操作是ELISA检测结果准确可靠的必要条件。国内医学检验一般均用板式点。
Elisa试剂盒的操作步骤：
方法一：用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：小鼠ELISA试剂盒反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或较浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。
方法二：用于检测未知抗体的间接法：
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法"的4、5、6。
其中还有一个步骤特别需要注意那就是洗涤：
洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。
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- ELISA试剂盒正确提纯的方法您知道吗？
ELISA试剂盒正确提纯的方法您知道吗？
在我们做ELISA试剂盒实验的时候，该怎么做才能提纯呢?针对这个问题天津本生生物ELISA试剂盒公司整理了以下几个方法。
试剂盒提纯方法：
1、蒸馏：对于易挥发的试剂，如常用的无机酸，有机溶剂等是比较常用的提纯方法，根据沸点的高低选用常压或减压蒸馏法。
2、升华：对于某些易升华的试剂，如碘、萘等，此法比较简便。
3、重结晶：适用于大多数固体试剂的提纯，其关键是选择好合适的溶剂。
4、溶剂萃取：无论将母体或杂质萃取到有机溶剂相中，均可达到提纯的目的。
5、离子交换色谱分离。
ELISA试剂盒收集标本请按下列流程进行操作：
1、细胞上清标本离心去除悬浮物后即可。
2、血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液。
3、血浆标本，推荐用EDTA的方法收集。
4、若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于-20℃，避免反复冻融。
5、血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂。
6、标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。
7、请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。
天津本生ELISA试剂盒公司得到广泛的应用，和各大高校、研究机构等建立了深厚的合作关系，为科研事业贡献绵薄之力!本生(天津)健康科技有限公司由具有行业背景和丰富市场经验的专业人士组成，于为生命科学研究领域提供产品，为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。
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2、升华：对于某些易升华的试剂，如碘、萘等，此法比较简便。
3、重结晶：适用于大多数固体试剂的提纯，其关键是选择好合适的溶剂。
4、溶剂萃取：无论将母体或杂质萃取到有机溶剂相中，均可达到提纯的目的。
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1、细胞上清标本离心去除悬浮物后即可。
2、血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液。
3、血浆标本，推荐用EDTA的方法收集。
4、若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于-20℃，避免反复冻融。
5、血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂。
6、标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。
7、请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。
本生(天津)健康科技有限公司由具有行业背景和丰富市场经验的专业人士组成，于为生命科学研究领域提供产品，为广大科研工作者提供服务。 既能满足研发类客户对产品种类、包装的特殊要求，也能满足生产型企业从小试、中试到规模化生产各个阶段的综合需求。
产品涵盖有荧光定量PCR耗材(八联管,单管,96孔板,384孔板,封板膜,辅助器等)，ELISA试剂盒，移液器吸嘴，离心管，冻存管，培养皿，培养板，培养瓶，吸头，仪器及手套，培养基，抗体，血清，色谱耗材，针头过滤器及实验室常用耗材。 品种类超过万种，广泛应用于科研院校、ZX实验室、分子生物学等科研领域。
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