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- sunmoon9927 2018-03-05 00:00:00
- 大肠杆菌常温放置会导致质粒降解,但短时间比如1-3天问题不大,而且一天只会导致大肠杆菌因为缺乏营养而停止生长,可以用来抽提质粒。超过三天会开始降解,一周后明显降解。质粒在4度可放置数个月,-20保存数年。 菌液一般放在-80度能保存1年。提出来的质粒Z好以沉淀的形式保存,用的时候再溶解、抽提,沉淀、再使用。质粒是用TE溶解,效果会好些,-20度放置时间长了是会发生一定的分解,比如质粒不再像新提的时候 那样是3条带,可能会变成一条带居多。 可以转化一次后重新提一些新的继续保存,Z好不要划线挑单克隆,而是转化复苏后直接加到含抗生素(antibiotic)的液体培养基中培养,因为单克隆中的质粒(特别是含有外源基因的重组质粒),可能存在基因突变的情况(虽然几率很小但是我在校正点突变的实验中就遇到过,基因原来测序正确的质粒经过一次重新转化划线挑单菌落提质粒后,再测序发现出现了一个新的碱基的突变)。 所以Z好是同时保存一份含有质粒的菌。虽然再次复苏的时候长得会比较慢,但活化后,还是跟新的没有什么差别的。 保存大肠杆菌(Escherichia coli)菌种,-20度对于不含质粒的菌种一般是用15%的甘油保存,对于含有质粒的菌种一般用10%的甘油保存,(PET操作手册上有说明),甘油浓度高了质粒的稳定性不好。
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