ACE C18-PFP色谱柱有保证的可重现性和完全可扩展性

与替代选择性同等重要的是zhuo越的可重现性。

固定相不同批次之间的变化是客户关注的Z常见原因。

ACE固定相通过保持对整个制造过程的严格控制并建立纯度、选择性、保留值、柱效和不对称性的严格规范，几乎完全消除硅醇基对HPLC分离的不可预测的不利影响。

因此，如下图所示，所有ACE C18-PFP色谱柱均可以保证批次间和柱间的可重现性。

将可用的3μm、5μm和10μm粒径与从毛细管到制备规模的一系列柱尺寸相结合，可确保方法可重现地放大或缩小。

上述色谱图显示，当硅胶批次和硅烷批次改变时可以获得zhuo越的可重现性，并当粒径和柱直径改变时可以获得可重现的可扩展性。

ACE C18-AR色谱柱有保证的可重现性和完全可扩展性

与替代选择性同等重要的是zhuo越的可重现性。

固定相的不同批次之间的变化是客户关注的Z常见原因。

ACE固定相通过保持对整个制造过程的严格控制并建立纯度、选择性、保留、柱效和不对称性的严格规范，几乎完全消除硅醇基对HPLC分离的不可预测的不利影响。

因此，如下图所示，所有ACE C18-AR色谱柱均可以保证批次间和柱间的可重现性。

将可用的3μm、5μm和10μm粒径与从毛细管到制备规模的一系列柱尺寸相结合，可确保方法可重现地放大或缩小。上述色谱图显示，当硅胶批次和硅烷批次改变时可以获得zhuo越的可重现性，并当粒径和柱直径改变时可以获得可重现的可扩展性。

为了获得Z佳色谱柱寿命，推荐使用2-8的pH范围。

为了在高pH值下增加色谱柱寿命，必须考虑有机缓冲液、低缓冲液浓度、高%有机溶剂和低温。

应用:  

Analgesic Separation  

市场常见色谱柱惰性比较

• lingxian的3μm、小孔径C18色谱柱品牌

• 50 x 2.1 mm i.d.LC/MS兼容尺寸

• 碱性分子惰性测试

• 峰柱效和不对称性研究

峰柱效比较  

结论
当分析吡啶（一种高碱性小分子）时，可以看到柱效、峰形和选择性的显著差异。
拖尾和保留增加表明，吡啶和固定相上表面的硅醇基之间存在不受欢迎的次级相互作用。

这些相互作用也可能导致色谱柱可重现性不佳。
之前已对ACE C18色谱柱进行了独立测试，发现具有出色的柱效和ji致的惰性。

新型ACE C18-PFP保持了这一优异性能。

ACE®固定相几乎消除了硅醇基对HPLC分离的不利影响

进一步的惰性测试数据包含在ACE HPLC色谱柱目录中。

此外，还提供了C18柱比较指南，其详细介绍了超过50种HPLC色谱柱品牌的材料特性，并将性能与许多测试探针进行了比较。

请联系菲罗门索取资料。

探索ACE C18-PFP的优势：
一种独特的C18键合HPLC色谱柱， 具有五氟苯基（PFP）相的额外选择性

• 将C18和PFP分离机制相结合来分离任一单独相不可能实现分离的混合物

• 改善极性碱性化合物的保留以获得更佳的分离效果

• 超惰性、超高纯度硅胶具有zhuo越的峰形和可重现性

• 为高温应用提供的键合相稳定性

• 超低流失相可以确保UV和LC/MS的兼容性

• 可获得高通量色谱柱尺寸

为什么需要另一种新的C18相色谱柱？
使用超纯、超惰性硅胶具有许多公认的优点，包括改善可重现性、寿命和色谱性能（特别是碱性分子）。

然而，由于超惰性硅胶表面不再有效促进分离，所以用高纯度硅胶制造的C18柱可以显示出接近相同的选择性。

因此，通过改用替代制造商的同等产品，一个lingxian品牌的问题分离很可能不会得到显著改善。

多年来，经验丰富的色谱学家们一直在寻求由这样lingxian的C18色谱柱品牌展示的、具有可靠性能和可重现性优点的相，但另外也为他们的挑战性应用提供了所需的替代选择性。

ACE C18-PFP 色谱柱有何不同？

C18键合相目前主导着HPLC市场，Z近的调查显示，它们仍然占据了所有HPLC色谱柱销售量的50-60％。

近年来，由于其提供的替代选择性，五氟苯基（PFP）键合相的使用显著增长。
然而，与C18键合相相比，PFP相传统上受疏水性降低、稳定性降低和显著柱流失的影响。

ACE C18-PFP相利用一种特别开发的配体，将C18链与完整PFP官能团相结合，形成可以保持lingxianC18相的疏水性、稳定性和低流失特性的相，同时也提供
了PFP相的多重保留机制以实现ACE C18-PFP的独特选择性。

“ACE C18-PFP是一种有价值的方法开发工具 - 是将C18保留性和稳定性与PFP选择性相结合的色谱柱”
lingxian制药公司的研发团队ling导者

何时应用ACE C18-PFP？

由于其相似的疏水特性，ACE C18-PFP色谱柱可用于通常会考虑“标准”C18色谱柱的应用中。

然而，由于其完整的五氟苯基官能团，ACE C18-PFP还被推荐用于涉及卤代芳族化合物、位置异构体和具有不同形状约束的分析物的分离。
应用证实，ACE C18-PFP可用于改善C18色谱柱上存在问题的分离。

独特的ACE C18-PFP相为C18色谱柱提供了替代选择性，但对规定为C18键合色谱柱的方法，保留了有效的选择。

在许多情况下，证实不适合C18色谱柱的相同评估条件被证实适用于C18-PFP色谱柱，这就避免了冗长的方法再开发。

PFP分离机制
ACE C18-PFP相显示有多个保留机制，包括疏水性、π-π相互作用、偶极-偶极、氢键和形状选择性。

虽然下述部分提供了相对强度的近似值，但每个保留机制的优势由溶质的物理/化学性质、其结构和所采用的色谱条件决定。

π-π相互作用

PFP环在相的表面上加入了芳香特性。

然而，PFP相不同于苯基相，因为电负性氟原子会产生缺电子的苯环，使得PFP相可以作为路易斯酸而起作用。

这将与能够给出电子的分析物（即路易斯碱）相互作用。
这与苯基相相反，苯基相含有富电子芳香环（由于不存在吸电子基团），因此它们可以作为路易斯碱而起作用。

偶极-偶极和氢键

PFP环中的碳-氟键具有强极性。

因此，PFP相可以通过在分析物与电负性氟原子之间发生的偶极-偶极或氢键相互作用来额外保留分析物。

任何这样的相互作用将导致保留增加。

形状选择性

PFP具有刚性环结构，当与其它可能的保持机制相结合时，可以赋予PFP相优异的形状选择性。

ACE C18-PFP相显示有PFP相的多重保留机制，色谱科学家们可能会利用这些机制来解决在传统C18相（仅主要依赖于疏水保留机制）上难以分离（即使并非不可能）的混合物。

具有独特选择性的C18 键合相：
1.有保证的可重现性
2.的键合相稳定性
3.疏水和五氟苯基“混合模式”的相互作用

改善色谱分离度
色谱分离的目标是在Z短的时间内获得目标组分的足够分离度（Rs）。

1.5的分离度可以实现基线分离，然而对于可以在实验室之间易于转换的耐用、可重法而言，理想的分离度是1.8-2.0。
分离度方程告诉我们什么变量可以影响分离度：

增加分离度Rs可以通过增加N、α或k来实现。

然而，如图1所示，可以看出，增加N或k以改善Rs的回报率快速下降。

例如，Rs仅随着N平方根的增加而增加。

可以通过增加柱长或降低柱填充材料的粒径或两者的某种组合来增加N。

无论哪种方式，系统背压随着N的增加而增加，因此通过增加N实现令人满意的分离，其“成本”可能是极高的压力。
同样，增加保留值（k值）将会增加Rs，但回报率也快速下降。

将k增加至超过10通常是Rs与分析时间之间的不利权衡，因为只有Rs的边际收益随着保留时间的增加而实现。

该效应的图形表示参见下述图1。

图1 N、α和k对分离度(Rs)的影响
对于典型的分离，其中：N = 10,000, k = 4, α= 1.1

增加N、α或k可以提高分离度(Rs)。

然而，从这些图中可以看出，N或k的提高都会迅速降低回报率。
另一方面，提高选择性（α）则没有这个问题，因此其成为开发分离方法时的Z佳优化变量。

增加α可以增加Rs，但不同于N和k,不会受回报率下降的约束。

α的变化对压力没有影响，对分离时间的影响也是微乎其微的（参见图2）。

因此，在开发分离方法时，α是Z重要的变数。

优化α可以使您在所有目标峰之间达到满意的分离度，同时保持系统背压和分离时间在可接受范围内。

改善色谱分离度- 选择性或柱效？
选择性(α)由流动相、温度和固定相化学物质控制。大多数方法开发策略将探索所有这些色谱变量。
如果使用“标准”3μm C18相没有达到足够的分离度，推荐优化分离的色谱选择性而不是分离柱效，如下述实例所示。
通过简单地将固定相化学物质（即色谱柱）改变为具有替代色谱选择性的固定相化学物质，易于在标准HPLC系统上获得所需分离度，而无需昂贵的UHPLC仪器。

另外，也可以避免复杂的流动相组分、升高的温度和侵蚀性pH条件。

图2利用选择性实现快速、高分离度的分离

样品：1）对乙酰氨基酚2）氢氯噻嗪3）甲基苯基亚砜4）甲基苯基砜5）阿司匹林6）非那西丁7）1,3-二硝基苯
8）1,2,4-三甲氧基苯9）苯甲酸乙酯10）尼美舒利11）布洛芬12）吲哚美辛13）甲芬那酸
色谱柱尺寸：50 x 2.1 mm 流速：0.60 ml/min 温度：40°C 检测：UV, 254 nm 流动相：A = 5 mM甲酸（溶于水中）以及B = 5 mM（溶于甲醇中），梯度= 在5分钟内3- B
比较数据不代表所有应用。

在保持C18键合相的同时，将粒径从3μm减小至2μm以下，并不能显著改善分离效果，另外也会导致压力明显增加。
ACE C18-PFP色谱柱为3个关键对提供了更佳的选择性(α)，因此与2μm以下的C18色谱柱相比，其可以提供的分离效果，即使2μm以下的色谱柱可以提供更高的柱效。
与使用具有高塔板数和高压的色谱柱尝试进行峰分离所获得的结果相比，利用选择性的能力可以获得更佳的分离效果。

许多相显示有键合相的流失，当基线稳定性受到影响时，这可以在梯度条件下被Z清晰地观察到。

尽管大多数超纯C18相可以预期产生低柱流失，但是需要谨慎选择替代选择性的键合相，以确保在低UV波长或LC/MS下进行分析时柱流失不会引起不可预见的问题。

需要注意的是，色谱柱的流失取决于许多因素，并且可能会随时间和系统而变化。

因此，在比较色谱柱流失时，必须在受控条件下进行。

本实例对超纯ACE C18色谱柱（顶部）的低流失特性与PFP色谱柱（中间）的高流失特性进行了比较。

ACE C18-PFP色谱柱（底部）显示其流失水平与ACE C18相当，尽管后者包含可以提供替代选择性的完整PFP官能团。

UV流失的比较

在相同条件下对更宽范围的色谱柱的进一步分析证实，lingxian的高纯度C18柱品牌显示出相似的低水平色谱柱流失。

然而，传统上推荐改变选择性的替代键合相（即苯基，极性嵌入式，PFP表面化学物质）的评估显示，所有这些非C18色谱柱均有显著更高的流失。
ACE C18-PFP将低流失水平（典型的lingxianC18色谱柱品牌）与替代选择性相结合，从而为分析者提供了有价值的方法开发工具。

当采用MS检测时，非C18相给分析者带来了传统上使用所出现的额外挑战。

在极端情况下，柱流失可能会污染检测器信号并掩盖重要分析物。
在以下实例中，在梯度运行的8-10分钟时段中监测柱流失，此时有机物的百分比增加至其Z大水平，因此柱流失也是Z高的。

MS Spectra（左边系列）提供了在该8-10分钟窗口中检测到流失的m/z裂解，而总离子色谱图（右边系列）阐明了在相同8-10分钟时间段内所获得的流失结果。

通过LC/MS分析，极性嵌入式色谱柱的TIC追踪和MS光谱（之前通过UV检测显示有显著流失）再次显示柱流失水平较高。

来自空白运行（在没有连接色谱柱的情况下开展）的MS光谱可以使背景系统流失量化。

ACE C18-PFP色谱柱和lingxian的C18色谱柱均显示与空白运行相似的流失水平，这表明正在发生的柱流失可以忽略。

ACE c18-pfp色谱柱拥有优良的温度和ph稳定性
在低ph值时，色谱柱退化是由键合相的水解所致，同时观察到保留值降低。

键合相的性质、硅胶表面的纯度和键合密度都是关键参数。

使用较低纯度的硅胶、较短的配体和较低的键合密度都是有助于加速配体断裂和降低柱寿命的因素。

使用设计用于加速色谱柱降解的条件，ace c18-pfp相显示保留损失极少，其寿命相当于高度稳定的ace c18相，这表明ace c18-pfp可能适用于pfp色谱柱显示寿命缩短的应用。
正如预期，基于中等纯度硅胶的c18键合色谱柱（zorbax sb-c18——之前被认为可以为高温和低ph应用提供优异稳定性的一种相）和低纯度硅胶（waters spherisorb ods2）显示寿命显著降低。

应用：取代的甲氧基苯异构体- lingxian的c18色谱柱

上述实例突出了以下事实：lingxian的c18品牌可以提供相似的选择性，并且均无法分离三、二和单甲氧基苯异构体。

保留值的差异（如中性参考标记所示）是由于纯粹的疏水作用并与母体硅胶特性（例如：表面积）相关。
由于独特的ace c18-pfp配体中包含完整的pfp官能团，ace c18-pfp对所有组分都表现出的分离度。

应用： 取代的甲氧基苯异构体- pfp色谱柱

上述应用强调了五氟苯基相在位置异构体分离中的用途。标准c18相无法分离出三、二和单甲氧基苯异构体。
传统的pfp相可以提供替代选择性，但是以疏水性的显著降低为代价，这就影响了分离效果。
ace c18-pfp可以保持c18相的疏水性，并提供的分离效果，从而可以进一步优化以减少分析时间。

ACE® Excel™ 色谱柱

ACE Excel 2μm UHPLC色谱柱

• 与所有市售UPLC和UHPLC仪器完全兼容

• 为UHPLC色谱柱提供口碑zhuo越的ACE HPLC色谱柱优势

• 为UPLC/UHPLC使用者提供了更多选择的固定相，包括强大的C18-AR和C18-PFP相

• 提供高水平的可靠性和耐用性

• 提供从UHPLC到HPLC再至制备型LC的易扩展性

• 适用于UHPLC的2、3和5μm粒径

制造UHPLC色谱柱是比较困难的，且通常认为它们不像HPLC色谱柱那样耐用和可靠。

凭借其在制造Z优质HPLC色谱柱方面的丰富经验，Advanced Chromatography Technologies能够生产出非常可靠的UHPLC色谱柱。

现在，色谱分析师将从UPLC和UHPLC仪器中获得更多的成果。UPLC和UHPLC使用者利用ACE ExcelUHPLC色谱柱现可以获得碱性化合物的峰形、改善柱间的可重现性、获得利用多种分离机制的附加固定相以及改善色谱柱的耐用性。

ACE Excel提供zhuo越的分离度和峰形

条件
流动相A = 5mM甲酸（溶于水中）和B = 5mM甲酸（溶液甲醇中）梯度5分钟内3-100％B
流速：0.6 ml/min
温度：40 ℃
检测：UV, 254 nm
色谱柱尺寸：50 x 2.1mm

Analytes
1. 对乙酰氨基酚
2. 氢氯噻嗪
3. 甲基苯基亚砜
4. 甲基苯基砜
5. 阿司匹林

6. 非那西丁
7. 1,3-二硝基苯
8. 1,2,4-三甲氧基苯
9. 苯甲酸乙酯
10. 尼美舒利

11. 布洛芬
12. 吲哚美辛
13. 甲芬那酸

这些比较性色谱图显示，C18键合相不能将所有13种分析物完全分离。由于其额外的分离机制，ACE Excel C18-PFP能够基线分离所有分析物。

备注：比较性分离物不代表所有应用。

ACE®是Advanced Chromatography Technologies Limited的注册商标。
ACE ExcelTM和HSCTM是Advanced Chromatography Technologies Limited的商标。
Advanced Chromatography Technologies Limited承认Advanced Scientific Instruments、Agilent Technologies Inc.、Alltech AssociatesInc.、GL Sciences Inc.、Idex Health＆Science LLC、Phenomenex Inc.、Shimadzu Corporation、Thermo Fisher Scientific和Waters Corporation的注册和未注册商标，且与上述这些公司没有任何隶属关系。

ACE Excel UHPLC色谱柱与所有市售UPLC和UHPLC仪器兼容

Thermo Scientic Accela

Dionex UltiMate 3000

Waters

• Acquity UPLC

• Acquity UPLC H–Class

• Acquity UPLC I–Class

安捷伦科技

• 1290 Infinity

• 1220 Infinity

• 1260 Infinity
  

• 1200 Infinity

岛津

• Nexera

• Prominence

加上许多其他品牌的UHPLC仪器，恕不能一一列举

ACE毛细管和纳米型色谱柱

• 毛细管（500μm和300μm）和纳米（100μm和75μm）尺寸

• 多种多样的键合相可用，包括ACE C18-AR和ACE C18-PFP

• 100Å和300Å孔径

• 柱效高、寿命长、可重现性好

• 特别适用于LC-MS和LC-MS-MS

除了从分析型（1.0-4.6 mm ID）到制备型（21.2-30 mm ID）广泛范围的色谱柱之外，ACE色谱柱也可提供毛细管（500μm和300μm）和纳米（100μm和75μm）尺寸。

ACE毛细管和纳米型色谱柱提供所有ACE键合相，其孔径为100Å和300Å。使ACE超惰性碱性去活色谱柱成为方法开发化学家选择的相同特征也使其成为毛细管和纳米型HPLC应用的理想选择。

柱子与柱子之间的可重现性受硅胶固定相载体的生成、固定相与固定相载体的键合以及色谱柱中固定相的填充的影响。

在色谱柱的制备过程中，每个阶段被控制得越好，色谱柱的可重现性和质量则越好。
ACE色谱柱在色谱柱制备过程中的每个阶段均得到了全面控制。

这些控制措施确保ACE色谱柱在柱间以及批次之间产生可靠且可预测的性能。

图13提供了典型批次验证测试的实例。

硅醇活性的细微变化是柱子与柱子之间选择性变化的主要原因之一。

ACE和ACE Excel色谱柱由于使用超纯试剂和严格的制造工艺控制（可以获得具有均一表面特性的高纯度硅胶固定相载体）而具有出色的可重现性。

将这种高纯度硅胶与先进的键合技术相结合，可以产生一系列高惰性的固定相，这些固定相几乎消除了色谱中的硅醇干扰，从而提供zhuo越的柱子与柱子之间的可重现性。

ACE® UltraCore™
具有扩展pH稳定性的超惰性实芯色谱柱

超惰性实芯颗粒

•  2.5μm和5μm超纯实芯（表面多孔）颗粒

• 单分散颗粒分布将高柱效与低压相结合

• 在HPLC仪器上实现UHPLC的柱效和性能

SuperC18™和SuperPhenylHexyl™相

• 两种键合相可以为快速、系统方法开发提供互补选择性

• zhuo越的可重现性和色谱柱寿命

• 超惰性相确保优异的峰形

扩展pH稳定性

• 在低、中和高pH条件下探索选择性变化

• 设计用于与LC/MS兼容的缓冲液

• 推荐pH范围1.5 – 11.0

也称为Fused-Core®、核-壳、SPP或核增强颗粒

通过调节pH来利用选择性
应用# 1801

色谱柱：ACE UltraCore 2.5μm SuperC18, 50 x 2.1mm
样品：1）阿替洛尔2）甲基苯基亚砜3）毒扁豆碱4）丙胺卡因5）布比卡因6）丁卡因7）1,2,3,4-四氢-1-萘酚8）卡维地洛9）硝基苯10）甲地嗪11）阿米替林12）苯戊酮
温度：40°C
流速：0.60Ml/min
波长：254nm
梯度：在5分钟内3 – B
酸性流动相：A：20mM甲酸铵（溶于水中）（pH3.0） B：2mM甲酸铵（pH 3.0）（溶于90:10 v/v 乙腈/水中）
碱性流动相：A：0.1％NH3（= 18mM）（溶于水中）（pH 10.7） B：0.1％NH3（= 18mM），pH 10.7（溶于90:10 v/v 乙腈/水中）

用于改善色谱分析和稳定性的封装键合技术（EBT™）

 ACE UltraCore SuperC18和SuperPhenylHexyl（苯基-已基）相使用我们独特的封装键合技术（EBT™）制造。
该技术显著增加了硅胶表面的配体覆盖率，有效消除了未键合硅醇基团的不利影响。
更高的配体覆盖率可以使惰性、色谱性能和稳定性得到改善。

ACE® UltraCore™固定相几乎消除了硅醇对UHPLC和HPLC分离的不利影响

色谱柱惰性比较

• 来自lingxian制造商的实芯色谱柱

• 对碱性分子吡啶的柱效比较

• 在50％峰高处测量的柱效

市场常见色谱柱峰柱效比较：

色谱柱尺寸：50 x 2.1mm

样品：1）尿嘧啶2）吡啶3）苯酚
流动相：30:70（v/v）甲醇/10mM NH4OAc（溶于水中）（pH 5.8） 流速0.20ml/min

温度：22°C

波长：254nm
比较数据不代表所有应用，转载已经过英国开放大学的许可。

产品的可用性和规格

ACE UltraCore色谱柱被设计用于LC/MS兼容缓冲液。
为进一步延长UHPLC和HPLC色谱柱的使用寿命，推荐使用ACE柱前过滤器
对于高达5000 psi的HPLC色谱柱连接，推荐使用PEEK™手紧接头（p/n ACE-CC10）
对于高达25000 psi的UHPLC色谱柱连接，推荐可重复使用的接头（p/n EXL-CC10）

 ACE UltraCore 2.5μm SuperC18 UHPLC/HPLC色谱柱（具有1000 bar/15000 psi压力限度的UHPLC/HPLC硬件规格）

ACE UltraCore 5μm SuperC18 UHPLC/HPLC色谱柱（具有1000 bar/15000 psi压力限度的UHPLC/HPLC硬件规格）

ACE UltraCore 5μm SuperPhenylHexyl（苯基-已基）UHPLC/HPLC色谱柱（具有1000 bar/15000 psi压力限度的UHPLC/HPLC硬件规格）

ACE®是Advanced Chromatography Technologies Limited的注册商标。ACE®UltraCore™、SuperC18™、SuperPhenylHexyl™和EBT™是Advanced Chromatography Technologies Limited的商标。Advanced Chromatography Technologies Limited承认Advanced Materials Technology Inc.、Phenomenex Inc.、Thermo Fisher Scientific、Victrex Plc和Waters Corporation的注册和未注册商标，且与上述这些公司没有任何隶属关系。  

ACE授权全国总代理,菲罗门全权负责ACE系列产品在ZG大陆市场的销售及售后服务

ACE色谱柱的特征

流速可在不损失分辨率的情况下改变2倍。

样品容量指在不损失分辨率的情况下可分析的多肽量。

Z大实际负载指产量和纯度合理的前提下允许纯化的Z多多肽量。

色谱柱ACE

ACE C18-AR色谱柱为“标准”C18色谱柱提供了替代选择性，推荐用于具有芳香族官能团的化合物

应用#2 - 芳香硝基苯类

在简单的等度条件下所开展的包含芳香族硝基苯化合物的测试再次显示，带头的C18色谱柱品牌可以提供近乎相同的选择性。

保留值的差异（如中性参考标记所示）是由于纯粹的疏水作用并与母体硅胶特性（例如：表面积）相关。

如上述ACE C18-AR色谱柱所示，中性标记的疏水保留值与其C18相当，但对芳香族硝基苯化合物的选择性显著增强- 保留增加和洗脱顺序完全相反。

该保留完全不同于用标准C18相所得结果，是由包含在ACE C18-AR色谱柱配体中的完整苯基官能团造成的。

色谱柱惰性比较

• 的3μm、小孔径C18色谱柱品牌

• 50 x 2.1mm i.d.LC/MS兼容尺寸

• 碱性分子惰性测试

• 峰柱效和不对称性研究

峰柱效比较

结论：
当分析吡啶（一种高碱性小分子）时，可以看到柱效、峰形和选择性的显著差异。
拖尾和保留增加表明，吡啶和固定相表面上的硅醇基之间存在不受欢迎的次级相互作用。

这些相互作用也可能导致色谱柱可重现性不佳。
之前已对ACE C18色谱柱进行了独立测试，发现具有出色的柱效和ji致的惰性。

新型ACE C18-AR色谱柱保持了这一优异性能。

ACE® 固定相几乎消除了硅醇对UHPLC和HPLC分离的不利影响

探索ACE C18-AR的优势

• 为“标准”C18色谱柱提供了替代选择性，额外推荐用于具有芳香族官能团的化合物

• 超惰性、超高纯度硅胶，具有zhuo越的峰形和可重现性

• 与高水含量的流动相兼容，以保留和分离极性化合物

• 为高温应用提供的键合相稳定性

• 超低流失相可以确保UV和LC/MS的兼容性

• 可获得高通量色谱柱尺寸

为什么需要另一种新的C18相？
使用超纯、超惰性硅胶具有许多公认的优点，包括改善可重现性、寿命和色谱性能（特别是碱性分子）。

然而，由于超惰性硅胶表面不再有效促进分离，所以用高纯度硅胶制造的C18柱可以显示出接近相同的选择性。

因此，通过改用替代制造商的同等产品，一个带头品牌的问题分离很可能不会得到显著改善。
多年来，经验丰富的色谱学家们一直在寻求由这样带头的C18色谱柱品牌展示的、具有可靠性能和可重现性优点的相，但另外也为他们的挑战性应用提供了所需的替代选择性。

ACE C18-AR有何不同？

C18键合相目前主导着HPLC市场，Z近的调查显示，它们仍然占据了所有HPLC色谱柱销售量的50-60％。

然而，近年来，由于它们提供的替代选择性，苯基键合相的使用显著增长。

据估计，苯基相目前占HPLC色谱柱销售量的10-15％，其它成为C18相之后的Z大子类别。

ACE C18-AR色谱柱采用了特殊开发的配体，将C18链与完整苯基官能团结合在一起，从而将C18和苯基特征的优点结合到单个相中。

基于与ACE C18相同的超惰性、超纯、超可重现性的硅胶平台，独特的ACE C18-AR色谱柱为C18柱提供了替代选择性。

ACE C18-AR显示出对C18键合色谱柱的替代选择性

“我们需要一个C18相来提供不同的色谱分析和改善的分离度- 所提供的ACE C18-AR” 某制药公司的高级分析师

何时应用ACE C18-AR？
由于其相似的疏水特性，ACE C18-AR色谱柱可用于通常会考虑“标准”C18色谱柱的应用中。

然而，由于其完整的苯基官能团，ACE C18-AR还被推荐用于涉及含有芳香族官能团的化合物的分离。
本手册中包含的应用证实，ACE C18-AR可用于改善C18色谱柱上存在问题的分离。

独特的ACE C18-AR相为C18色谱柱提供了替代选择性，但对规定为C18键合色谱柱的方法，保留了有效的选择。

在许多情况下，证实不适合C18色谱柱的相同评估条件被证实适用于C18-AR色谱柱，这就避免了冗长的方法再开发。

应用#1 - 水溶性维生素

含有水溶性维生素的该测试阐明，带头的C18色谱柱品牌可以提供类似的选择性。

优化温度和梯度后，在ACE C18上实现了可接受的分离，关键对2，3仅基线分离。

为了提高方法的耐用性，Z好尝试并进一步改善分离度。由于评估条件已经Z佳，我们现在研究改用另一种C18色谱柱品牌是否可以改善我们的关键对（峰2、3和5、6）的分离。

这种方法代表了目前在许多实验室中开展的方法开发策略。
如上述结果所示，Zorbax XDB C18和Sunfire C18色谱柱不再分离关键对2、3，而Luna C18（2）色谱柱显示关键对2、3的分离度略有改善，但当前关键对5、6 仅得到了部分分离。
然而，独特的ACE C18-AR相可以提供与带头的C18色谱柱品牌完全不同的分离度。

两个关键对的分离度得到显著改善，方法的耐用性也不再是问题。

实际上，现在可以进一步优化色谱柱尺寸和评估条件（以减少分析时间）。

ACE C18-AR色谱柱超低流失相可以确保UV和LC/MS的兼容性

许多相显示有键合相的流失，当基线稳定性受到影响时，这可以在梯度条件下被Z清晰地观察到。

尽管大多数超纯C18相可以预期产生低柱流失，但是需要谨慎选择替代选择性的键合相，以确保在低UV波长或LC/MS下进行分析时柱流失不会引起不可预见的问题。

ACE C18-AR显示UV下的低柱流失

本实例对超纯ACE C18色谱柱（顶部）的低流失特性与苯基色谱柱（中间）的中等流失特性进行了比较。

ACE C18-AR色谱柱（底部）显示其流失水平与ACE C18相当，尽管后者包含可以提供替代选择性的完整苯基官能团。

UV流失的比较

lingxian的C18品牌和普通替代键合相的评估

在相同条件下对更宽范围的色谱柱的进一步分析证实，lingxian的高纯度C18柱品牌显示出相似的低水平色谱柱流失。

然而，传统上推荐改变选择性的替代键合相（即苯基，极性嵌入式，PFP和AQ型表面化学物质）的评估显示，所有这些非C18色谱柱均有显著更高的流失。
ACE C18-AR将低流失水平（典型的lingxianC18色谱柱品牌）与替代选择性相结合，从而为分析者提供了有价值的方法开发工具。

当采用MS检测时，非C18相给分析者带来了传统上使用所出现的额外挑战。

在极端情况下，柱流失可能会污染检测器信号并掩盖重要分析物。
在以下实例中，在梯度运行的18-25分钟时段中监测柱流失，此时有机物的百分比增加至其Z大水平，因此柱流失也是Z高的。

MS Spectra（左边系列）提供了在该18-25分钟窗口中检测到流失的m/z裂解，而总离子色谱图（右边系列）阐明了在相同18-25分钟时间段内所获得的流失结果。

ACE C18-AR显示LC/MS下的低柱流失

通过LC/MS分析，极性嵌入式色谱柱的TIC追踪和MS光谱（之前通过UV检测显示有显著流失）再次显示柱流失水平较高。

来自空白运行（在没有连接色谱柱的情况下开展）的MS光谱可以使背景系统流失量化。

ACE C18-AR色谱柱和lingxian的C18色谱柱均显示与空白运行相似的流失水平，这表明正在发生的柱流失可以忽略。

结论：
ACE C18-AR相可用于为lingxian的C18色谱柱提供不同的选择性，同时不会遇到与许多替代（即非C18）键合相相关的柱流失问题。

ACE C18-AR色谱柱为高温应用提供的键合相稳定性

温度和pH稳定性
在低pH值时，色谱柱退化是由键合相的水解所致，同时观察到保留值降低。

键合相的性质、硅胶表面的纯度和键合密度都是关键参数。

使用较低纯度的硅胶、较短的配体和较低的键合密度都是有助于加速配体断裂和降低柱寿命的因素。

使用设计用于加速柱降解的条件，ACE C18-AR色谱柱显示保留损失极低，其寿命与高度稳定的ACE C18色谱柱相当。

两相均采用相同的超纯硅胶制造，并且这两种固定相比Zorbax SB C18耐久性更好（Zorbax SB C18是一种之前被认可的、可在高温和低pH应用中提供出色稳定性的固定相）。
正如预期，基于低纯度硅胶（Waters Spherisorb ODS2）的C18键合色谱柱在这些加速条件下显示寿命大大降低。
特别值得注意的是lingxian的苯基色谱柱与ACE C18-AR色谱柱之间的寿命比较结果。

尽管使用了超纯硅胶，但与ACE C18-AR色谱柱相比，苯基色谱柱的使用寿命降低，这表明ACE C18-AR色谱柱可能适用于常规苯基色谱柱呈现寿命降低的应用。

应用#4 - 镇痛剂分离

上述应用显示在ACE C18色谱柱上分离镇痛剂时，可以观察到4对共洗脱峰。

该分离也与其他lingxian的C18柱品牌可以预期的结果相同，由于相同（主要是疏水性）的相互作用，它们显示选择性极为相似。
基于与ACE C18相同的超惰性、超高纯度硅胶平台，独特的ACE C18-AR相可以提供替代选择性来使所有15种组分分离，包括之前确定的4个关键对。

经发现，证实不适合ACE C18的相同评估条件可以适用于ACE C18-AR柱，这就避免了冗长的方法再开发。

ACE C18-AR色谱柱与高水含量的流动相兼容，以保留和分离极性化合物

兼容高水含量的流动相
虽然主要设计是显示对“标准”C18色谱柱的替代选择性，但ACE C18-AR色谱柱也可在100％水性流动相中防止保留损失，并且可在快速梯度中使用，其中快速再平衡和防止保留损失至关重要。

高水含量条件下的Z大可重现性
当分离强极性的水溶性化合物时，通常需要高水含量（> 95％）的流动相来达到足够的保留。

然而，在该条件下操作常规C18色谱柱可能会导致色谱分析的可重现性不佳。

随着时间的推移，色谱峰将以越来越短的保留时间被洗脱，色谱峰之间的分离度将越差。
该保留损失Z初被认为是由于“固定相塌陷”，由此键合相配位体逐渐挤成一团，从而与样品的相互作用降低。

然而，Z近的研究表明，实际上正在发生“孔脱湿”。

流动相可在高水含量条件下从孔中被排挤出来，并且保留损失是由接触表面积的损失所致。
ACE C18-AR色谱柱的完整苯基官能团可防止孔脱湿和随后的保留损失，即使在高水含量的条件下也能实现高度可重现性的色谱分析。

100％水性流动相的可重现性色谱分析

用于色谱分析的超惰性硅胶
设计用于高水含量条件下的许多色谱柱受所使用的低纯度硅胶的影响，并且极性碱性分子所呈现的峰形不佳。

这导致色谱分析不佳，并Z终导致色谱柱的可重现性不佳。
ACE C18-AR色谱柱由与所有ACE相相同的超惰性、高纯度硅胶制造，以确保获得优异的色谱分析和可重现性。

lingxian的竞品比较- 亲水基

Zorbax SB-Aq色谱柱显示峰1和3的性能显著损失，而超惰性ACE C18-AR色谱柱保持zhuo越的亲水基峰形。

应用#3 - 含硫化合物

含硫化合物的高难度分离再次表明，lingxian的C18柱品牌提供基本相同的分离，同时获得两对共洗脱峰。
然而，C18-AR色谱柱提供的分离再次与lingxian的C18色谱柱品牌完全不同。

由ACE C18-AR色谱柱提供的附加芳香族（π-π）相互作用使得关键对1、2和3、4完全分离。