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- dabulqinyixia 2008-06-26 00:00:00
- 1.MTS 2.XTT比色法 3.3H-TdR掺入法 4.MTT法 MTS检测法 1.培养IL-2依赖细胞株CTLL-2细胞或HT-2细胞(检测IL-2),或者IL-3依赖细胞株FDC-P1细胞或FL5.12细胞(检测IL-3)到对数生长期。 2.取96孔细胞培养板,每孔加0.1ml含1×104~2×104上述细胞之一的DMEM培养液(加10%小牛血清)。 3.每孔加0.1ml系列稀释的待测细胞因子(IL-2或IL-3)样品或细胞因子标准品,在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24小时。 4.每孔加20μl MTS/PMS混合液,继续培养3~4小时显色。 5.检测前摇晃培养板10秒钟,混匀颜色。在酶联检测仪上,波长570nm(或490nm,或570nm和690nm)处检测各孔的光吸收值(OD)。用样品稀释度对OD值(OD570、OD490或OD570/OD690)绘制剂量-反应曲线,根据标准品曲线计算样品中细胞因子的量。 XTT法: 用XTT代替MTT可省去溶解还原产物结晶的步骤,XTT可以被活细胞中的代谢酶还原成黄色水溶性的代谢产物(formazan)。代谢产物在OD450处有吸收峰。 MTT检测法 1.取96孔细胞培养板,每孔中加0.1ml含2×104~10×104靶细胞的培养液(含10%小牛血清的RPMI-1640培养液),在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2~3小时让细胞帖壁(如果是悬浮细胞可直接进行下一步) 2.用RPMI-1640培养液2~10倍递次稀释细胞因子标准品,根据情况2~5倍递次稀释待检样品,每孔加0.1ml稀释的标准品和待检样品,每个稀释度3个重复孔。对照孔6个:3个阳性对照孔,每孔加0.1ml含大剂量细胞因子的RPMI-1640培养液,3个阴性对照孔,每孔加0.1ml RPMI-1640培养液。在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24~48小时或预定的时间。 3.吸去培养液,用PBS洗涤一次(如为悬浮细胞,应在吸去上清液前离心培养板)。 4.每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液,在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4~6小时。 5.每孔加0.1ml酸化异丙醇,也可用含10% SDS的10mmol/L HCl代替酸化异丙醇,在振荡器上振荡混匀,让还原产物充分溶解。置酶联检测仪上测定光密度(OD)值,检测波长570nm,参考波长630nm。以OD值对样品稀释度作图,比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。 3H]脱氧胸苷摄入法: 1.用RPMI-1640培养液洗涤对数生长期(培养3天)的CTLL-2细胞两次,每次250×g离心10分钟,洗去培养液中残存的IL-2。 2.用台盼蓝(1% Trypan blue)染色法计数细胞并决定细胞的活力,用10%小牛血清的RPMI-1640培养液悬浮细胞至1×105/ml。 3.在96孔细胞培养板中每孔加0.1ml倍比稀释的标准IL-2或待测样品,每个稀释度三个复孔,标准IL-2从40 IU/ml稀释到0.019 IU/ml(8~10个稀释度),阴性对照孔不加IL-2。 4.每孔加0.1ml细胞悬液,在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养18~24小时。每孔加10μl(0.5μCi或1.85×104Bq)[3H]脱氧胸苷,继续培养4小时。 5.用多头细胞收集器将细胞收集到玻璃纤维滤纸上,用3%醋酸水溶液滤纸3次,洗去游离的[3H]TdR。将滤纸置液体闪烁瓶中,加入5ml闪烁液。在液体闪烁仪上计数细胞摄入的同位素活性(每分钟放射性计数,cpm),根据仪器效率换算成dpm(每分钟衰变数)。 6.用dpm值对样品稀释倍数作图。在图上,标准IL-2的曲线与待测样品的曲线应当呈平行的S型,说明是同样的分子反应。比较同样dpm处的不同稀释倍数,决定待测样品的相应浓度。 以上方法仅供参考。
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- GB/T 13542-92薄膜电弱点的测定方法
50点电极法试样
取不小于450 mmX650 mm长方形试样两张,当宽度小于450 mm时,可取若干张,以保证能做 50个击穿点。试样要保持清洁、平整、无折皱、无损伤。
电极
上电极为直径25 mm,倒角半径为2. 5 mm,高度120 mm的黄铜柱形电极,工作面粗糙度Ra小于 L 25 pmo
在平台上铺一张厚约3 mm的橡皮,其邵氏硬度为60度〜70度,在橡皮上铺一张退火铝箔作为下电极。 电极工作面应平整、光滑、无伤痕。
击穿装置
高压试验变电器的容量应保证次级额定电流不小于0. 1 A,直流电源的电压脉动系数不应超过 5%,保护电阻为0.2 Q/V〜0.5 Q/V,调压器应能均匀调节电压,过电流继电器应有足够的灵敏度以使 试样击穿时在0.1 s内切断电源,动作电流应选择适当值,避免发生击穿后不动作或未击穿而产生误动 作,电压测量误差不超过4%。
试验步骤
采用单层试样试验,将试样置于上下电极间,采用连续升压法,其升压速度为。.2 kV/s〜 1.0 kV/s,均匀等距离测量50点,读取试样击穿电压值,并按4.1.1规定测量厚度。
试验结果
在50点击穿测定值中分别去掉Z大值,Z小值各5点,计算其余40点的算术平均值并找出Z小值。 将击穿电压平均值和Z小值除以试样厚度,即为该批薄膜介电强度的平均值和Z低值,精确到个位。
介电强度的出厂检验及用户的验收试验可采用50点电极法进行,型式检验及有争议时的仲 裁试验采用元件法进行,也可按供需双方协商进行。
1819电弱点 19.1方法A窄条试验法
本方法适用于试验窄条薄膜。
试验装置
高压直流发生装置:能产生。〜5 kV的直流高压,电压波动不大于士 1%。该装置应能在试样弱点 击穿后约0.1 s内使电压回升到原来设定的电压。
试样和电极的配置:如图10所示,该设备能将薄膜试条以近似90°的圆周角绕報子以5 m/min的 恒速移动,低压电极由不锈钢制成并抛光的直径为15 mm的圆柱体,作为低压电极的圆柱体应接地可 靠并能灵活转动;高压电极为10 mm〜20 mm宽、厚度约为7 /zm的退火铝箔,重锤用来保证铝精与试 样接触良好,每10 mm宽铝精加荷约0.4 No
计数器:能灵敏地记录试样弱点的击穿点数。
试样
试样为薄膜卷,宽度大于铝箔的宽度至少5 mm(每边至少超出铝箔2.5 mm),薄膜被试面积按产 品标准规定。
程序
按图10安装好试样,调节试样移动速度为5 m/min,在试样移动的条件下,在辐子和铝箔间施加产 品标准规定的电压。记录被试有效面积上的电弱点数。
程序
按图11装好试样和电极,将高压电极和接地电极分别接到高压直流发生器的引出端(用约 270 mmX160 mm的电绝缘板上放置一张250 mmX140 mm的金属化塑料箔,金属化层朝上,金属化 塑料箝的自由端接地来作为接地电极;用另一张宽140 mm的金属化塑料箔放置在试样上,金属化层朝 下,在箔上面放置一块140 mmX140 mm,厚度为4 mm的软橡皮,然后折叠金属化薄膜把橡皮块包住, 并在其上再压一块140 mmX140 mm的金属板并作为高压电极)。以0.5 kV/s的速度自零升高电压 到产品标准规定的电压值,然后将此电压保持1 min后降下电压至零。拿出试样,用放大镜辩别并计数 离电极边缘20 mm内的击穿点数。每个试样的被试面积以0.01 m2计。
结果
试验结果为十个试样上测得的电弱点数除以被试面积,以个/m?表示。
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- GB/T 37191-2018生橡胶水分含量的测定卡尔费休库
生橡胶是在橡胶树体内生物合成的聚异戊二烯。天然橡胶具有很好的弹性,弹性模量为2~4MPa,约为钢铁的1/30000,而伸长率为钢铁的300倍。
GB/T 37191-2018 生橡胶 水分含量的测定 卡尔费休法
范围
本标准规定了采用卡尔费休库仑滴定法测定生橡胶和混炼胶中水分含量的方法。
本标准适用于水分含量在0.01%~1%的生橡胶。
注: 本方法是一种非常敏感的方法,尽可能排除样品接触水,包括与周围环境的接触。
原理
样品中的水与存在于低醇溶液例如甲醇和有机相中的二氧化硫与碘发生定量反应,反应方程如下:
卡尔费休库仑滴定法中,碘离子(I-)通过电化学产生碘(I2),产生的碘与样品中水反应,按照上述反应式进行滴定,直至所有的水发生反应。按下列反应通过测定I-生成I2需要的电量计算样品中的水分含量。
根据法拉第定律,产生碘的物质的量与消耗的电量成正比。在上述方程中,I2和H2O反应比例是1:1,即1mol(18g)水相当于2×96500C电量,或1mg的水相当于10.72C电量。
试剂和材料
除非另有说明, 在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。
卡尔费休库仑滴定标准水样: 1.00mg/g±0.05mg/g或0.10mg/g±0.01mg/g(可溯源) 。
阳极溶液: 用于有隔膜滴定池。
阴极溶液: 用于有隔膜滴定池。
通用试剂: 用于无隔膜滴定池。
干燥氮气: 满足仪器要求。
干燥剂: 氧化铝或分子筛。
乙醇。
浓硝酸。
正己烷。
仪器
带有蒸发器的卡尔费休库仑滴定仪: 其组成见图1。
水蒸发器包括加热炉、加热管、温度控制单元、载气流量计和装有干燥剂的载气干燥管。
分析天平: 能精确至0.1mg。校准
用可溯源标准水样校准仪器,测定标准水含量的回收率。
取样和制样
按照 GB/T 15340 的规定取实验室样品,从实验室样品中取0.5g~1g试样,用合适的工具如剪刀或小刀将试样切成小粒。
试样的尺寸应尽量小,并在较短的时间内完成滴定。
分析
仪器稳定至少30 min,在稳定期间,用干燥氮气吹扫蒸发器和反应池,并使加热炉保持高温状态。
根据仪器使用说明书要求设定参数,开始漂移不大于20μg/min、停止漂移不大于5μg/min,根据不同种类的橡胶, 推荐按表1设定加热炉的温度。
根据水分含量选择试样量,见表2。
将空样品后放入加热炉,重复测定空白2次~3次。
按照表2的试样量,直接称取试样,精确至0.1mg。
按照仪器使用说明书要求将样品放入加热炉中。
按下仪器的开始按钮,载气流量可根据仪器使用说明书要求设定。
滴定直至测定结束。
记录水分含量。
水分含量M 按照式(1)计算,以质量分数(%)计。
式中:
m MO一一试样中水的质量,单位为微克(μg);
m TP 一一试样的质量,单位为克(g)。
用仪器软件自动或者手动扣除漂移(空白)或者其他影响因素。
取两次测定结果的算术平均值作为试验结果,表示至小数点后三位。
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