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导读

在PCR实验中，我们加完反应体系后，都会认真仔细的盖好盖子，并反复确认已经盖好了盖子，以避免出现试剂蒸发的情况。可是有时候我们也会有一些疑惑：明明已经确认盖子盖紧了，实验结束后，还是会出现试剂蒸发的现象。这是为什么呢？

其实试剂的蒸发是PCR实验中常见的问题之一，影响试剂蒸发的因素也比较多。

蒸发是指试剂在PCR实验过程中，反应液在高温下气化，又凝结在管壁或顶盖上，形成水雾或水珠，或直接从管盖或覆膜的气隙中溢出，造成反应液浓度变化、反应液量减少，有的甚至蒸干，导致实验无效等。

影响试剂蒸发的因素主要有以下三点：

01热盖压力、温度

在PCR实验中，我们一般通过加热盖的办法来防止试剂蒸汽的凝结，热盖温度一般比反应液的温度高，以防止蒸汽凝结。

PCR 仪的热盖大致可以分为以下四种：非可调式热盖、可调节式热盖、自适应式热盖和自动式热盖。而可调节式热盖利用手拧压紧式，拧不紧会发生试剂蒸发，通过增加热盖压力可以尽量减少边缘蒸发的现象。有时拧得过紧反而可能出现压坏管子、拧坏旋钮的情况。通常，采用电动智能热盖，能够自动感应不同高度的耗材，自动压紧耗材，压力均匀且恒定，从而能够减少试剂蒸发和人工误差，提高实验准确度和可重复性。

02耗材形变

对于蒸汽的泄漏，大部分人认为是热盖的压力不够所致。热盖的压力固然很重要，但这仅仅是一个方面，其实耗材也很关键。

PCR 孔板通常为塑料材质，在受热后发生膨胀，产生较大地变形，用于放置 PCR 孔板的 PCR 金属基座则受热膨胀率极小，PCR 孔板受热膨胀后不能正常沿平面延展进而中间形成拱起状态，从而造成上方热盖不能全面地与 PCR 孔板上表面充分接触，造成温度、压力不均，引起 PCR 孔板边缘试剂的蒸发，影响 PCR 检测效果。

03耗材密封不严

热盖与耗材压紧并不等于盖紧了 PCR 管盖，PCR 孔板质量参差不齐。优质的耗材，管口和盖子表面光滑，盒盖后密封性好，不易泄漏。而劣质耗材，管口不平，有径向纹路，容易造成泄漏，甚至蒸干。

因此在PCR实验中，尽量选择优质、合适的耗材。同时也可以扩大反应体系，尽量减少体系蒸发对反应的影响。