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　　此次实验主要是为膝关节滑液组织制备单细胞，让我们一起来看看净信单细胞制备仪是如何制备膝关节滑液组织单细胞悬液，对其样品前处理效果和悬液效果如何？

　　实验地点：上海**大学医学院东区单细胞中心

　　实验仪器：单细胞悬液制备仪（温控型）JX-CKSM-6WK

　　样品前处理制备实验步骤：

　　1、打开仪器电源开关，将仪器界面中的加热点开预热一段时间持恒温。

　　2、将组织稍微剪切成小块，放入净信2ml研磨管中。

　　3、加入净信消化酶旋上盖子，上下微微晃动将其组织和消化酶均匀混合。

　　4、将混合好的研磨管放入加热模块中，再将研磨管放入热板中，盖上盖子。

　　5、启动设备，待设备停止运行后打开仪器盖子，取出样品管

　　6、将样品管中的液体和剩下的组织一起倒入过滤管中，再加入终止液后得到浑浊的液体，即单细胞悬液。

　　样品处理前后效果图：

　　显微镜下的细胞呈现：

　　实验样品组织制备注意事项：

　　1、消化酶和终止液均需要在冷冻环境下保存

　　2、消化酶解冻时需在常温条件下解冻，不可以放入水浴或者其他加热仪器中解冻，温度升高对酶的活性会有很大的影响。

检测仪器：日本INSENT公司的味觉分析系统 型号：TS-5000Z

实验结果：

1、干混悬颗粒的AN0碱性苦味和BT0盐酸盐类苦味

干混悬颗粒溶解后具有较大的粘性，三个干混悬颗粒AN0传感器测试结果反映三者具有很大的差异，其中C碱性苦味为负数，可认为其没有碱性苦味，B碱性苦味值较大，A样品的碱性也有一定的碱性苦味，但与B相比苦味很小。盐酸盐类苦味（如盐酸小檗碱），从数据上看，B样品不仅有碱性苦味还有很强的盐酸盐类苦味。A样品盐酸盐苦味也很小。C样品没有碱性苦味，盐酸盐类苦味传感器响应明显。

2、干混悬颗粒酸性苦味测试

酸性苦味传感器是一个广谱型传感器，可以测试食品中、植物性中药中的几乎所有苦味成分。对比苦味先期味道和回味可见，吞咽后口腔中残留的苦味要远小于药品本身的苦味，从图3中可见，酸性苦味先期C>B>A，吞咽后口腔中残留则是A>B>C（详见图4），可见C样品的苦味残留很少，A和B酸性苦味回味接近。

实验目的：制备小鼠大脑的单细胞悬液

实验仪器：单细胞悬液制备仪，研磨套装管，滤管，移液枪，培养皿，镊子，手术刀

实验试剂：PBS液，净信消化酶，终止液

操作步骤：

1、开机预热，打开加热模块1，加热模块2

2、取活体组织后，放入PBS液中去红，然后取20-50mg（约小米粒大小），再分成若干等分

3、把消化酶用移液器加入研磨套装管中，将加满消化酶的离心管放入预热模块中预热几分钟

4、将处理好的组织用镊子转移到加满消化酶的离心管中

5、将装满消化酶和组织的离心管放置到加热板中，选择25分钟程序，开始运行

6、程序结束取出离心管，将消化好的组织液转移到过滤管中，即得到一管单细胞悬液

仪器介绍：

上海净信单细胞制备仪JX-CKSM-6WK（6通道加热型）是一种集成金属浴消化与温和剪切组织的新一代细胞悬液制备设备，应用于流式细胞术/单细胞测序/原代细胞培养等实验，具有起始组织量小，时间短，细胞得率高，细胞活性高的特点。采用国际DIN方法设计，低噪音，使用方便，性能稳定。

应用领域：肿瘤研究 心血管研究 干细胞研究 免疫研究 神经科学研究

产品应用：

单细胞测序（Single-Cell RNASeq)

多色流式分析（Multicolor Flow Cytometry)

质谱流式细胞计数（Mass Cytometry)

原代细胞分离培养（Primary Cell Isolation And Culture)

细胞ZLCAR-T

实验目的：制备小鼠肝、肾、脾的单细胞悬液

实验仪器：单细胞悬液制备仪，研磨套装管，滤管，移液枪，培养皿，镊子，手术刀

实验试剂：PBS液，净信消化酶，终止液

操作步骤：

1、开机预热，打开加热模块1，加热模块2

2、取活体组织后，放入PBS液中去红，然后取样品

3、把消化酶用移液器加入研磨套装管中，将加满消化酶的离心管放入预热模块中预热若干分钟

4、将处理好的组织用镊子转移到加满消化酶的离心管中

5、将装满消化酶和组织的离心管放置到加热板中，选择25分钟程序，开始运行

6、程序结束取出离心管，将消化好的组织液转移到过滤管中，即得到一管单细胞悬液

肝脏组织

脾组织

肾脏组织

仪器介绍：单细胞制备仪是一种集成金属浴消化与温和剪切组织的新一代细胞悬液制备设备，应用于流式细胞术/单细胞测序/原代细胞培养等实验，具有起始组织量小，时间短，细胞得率高，细胞活性高的特点。采用国际DIN方法设计，低噪音，使用方便，性能稳定，带加热功能，对样品的消化处理过程始终处在恒温状态。

优势：

1、组织高利用率、单细胞化过程高效、单细胞高产出

2、针对临床穿刺样本，使组织的利用率达到100%，细胞产量可达10万个以上v

3、针对原细胞培养样本，在15min内完成组织到单细胞过程，降低细胞逆境时间，提高细胞存活率

4、针对组织单细胞测序，快速完成单细胞化处理，获得高产且活率在85%以上的单细胞，以小鼠组织为例：

5、针对不同的样本选择不同的程序（6组预设程序），处理样品量4*2ml/6*2ml/8*2ml