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　　本生牛乳铁蛋白(LF)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

　　本试剂盒仅供研究使用。

　　检测范围： 96T25μg/mL–850μg/mL

　　使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关样本中乳铁蛋白(LF)含量。

　　实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛乳铁蛋白(LF)水平。用纯化的牛乳铁蛋白(LF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入乳铁蛋白(LF)，再与HRP标记的乳铁蛋白(LF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的乳铁蛋白(LF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中乳铁蛋白(LF)浓度。

　　试剂盒组成

　　130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液

　　6ml×1瓶2酶标试剂

　　6ml×1瓶8标准品(1600μg/mL)

　　0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液

　　1.5ml×1瓶4样品稀释液

　　6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液

　　6ml×1瓶11封板膜2张 6显色剂B液

　　6ml×1/瓶12密封袋1个

　　标本要求

　　1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽s快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

　　2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

　　操作步骤

　　1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。800μg/mL5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液400μg/mL4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液200μg/mL3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液100μg/mL2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液50μg/mL1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

　　2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

　　5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7.温育：操作同3。

　　8.洗涤：操作同5。

　　9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

　　10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　操作程序总结：

　　计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

　　注意事项

　　1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4.请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物请避光保存。

　　7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9.本试剂不同批号组分不得混用。

　　保存条件及有效期1.试剂盒保存：2-8℃。2.

　　有效期：6个月

乳铁蛋白是一种免疫蛋白，存在于人体的乳汁和各种分泌液中，以母乳中的含量最G。

中国营养学会妇幼营养分会的《乳铁蛋白婴幼儿健康效应专家共识》中指出，牛乳中的乳铁蛋白与人乳中相似度较高，大量临床研究也表明其有与人乳铁蛋白类似的功效。

我们平时接触到的“乳铁蛋白”，基本就是从牛乳中提炼而来的。

乳铁蛋白，这两年之所以火爆，是因为它对抵抗力的提升很有助益。

具体来说，乳铁蛋白的作用可以分为如下几点：

1. 有效YI制有害微生物生长，提升抵抗力

2. 参与身体内铁元素吸收和运输

3. 促进肠道发育

已有研究表明，乳铁蛋白在预防和辅助治疗婴幼儿腹泻、新生儿坏死性小肠结肠炎、呼吸道疾病、新生儿败血症，改善婴幼儿贫血、促进宝生长发育方面都有一定作用。

敲黑板：乳铁蛋白ZUI好的来源是母乳，这一点，毋庸置喙。

除了母乳只有它才配拥有乳铁蛋白，翻看《GB 14880-2012 食品营养强化剂使用标准》，国家允许添加乳铁蛋白的食品，其实也就这几种：

看！只有婴幼儿配方奶粉、调制乳、发酵乳和含乳饮料。

简单地说，就是国家规定，乳铁蛋白，作为营养强化剂，只能添加在乳制品中（以乳为载体宝-可能会更好吸收）。

对于婴幼儿来说，额外添加乳铁蛋白的载体，ZUI好是配方奶了。

但是要特别关注下，乳铁蛋白含量是否合适。超标肯定不行，太低了又浪费钱。对于婴幼儿配方奶粉，国家标准有更新，扩大了用量：泡好奶液后，乳铁蛋白含量不得超过100mg/100ml。

△《GB 14880-2012 食品营养强化剂使用标准》

广大消费者对于乳铁蛋白的含量高低存在争议，经过中检维康生物公司的不断研发，现推出全新产品，新产品已经在各地区食药系统和第三方检测机构大量使用。

Clover肝素免疫亲和柱

检测样品包括液体奶、婴儿配方奶、奶粉等

准确性高，添加回收率可达85-105%

稳定性好，重复检测变异系数＜10%

特异性高，对乳铁蛋白起到富集净化效果

应用广泛，全世界官方检测主流检测方法

参与多项国家标准制定，符合AOAC方法