仪器网（yiqi.com）欢迎您！

参与评论

评论

登录后参与评论

全部评论(3条)

• 

  heitiansh1 2011-11-14 00:00:00

  一、乙醇是核算的沉淀剂，也可以洗脱醇溶性杂质。 二、应该没法补救了。一样的。 三、基因组DNA分子很大链很长，在起初的蛋白质沉淀时，绝大部分已经缠绕在一起沉淀下去了，此外，试剂盒中套管中的纤维膜只能特异的吸附几百至几千bp的DNA片段，小的不能吸附，大的不能被洗脱下去，因此可以很好分离大分子量的基因组DNA和较小分子量的质粒DNA

  赞(17)

  回复(0)

  评论

  评论

  登录后参与评论

• 

  潜新儿 2011-11-14 00:00:00

  wash buffer其实是70%的无水乙醇，其目的是“wash”，也就是洗去柱子上残余的盐分其他成分。 没有加无水乙醇，那就悲剧了，柱子上的DNA在这一步已经被洗的差不多了，都脱下了。做胶回收的wash buffer应该是成分类似，但不同公司，或不同的柱芯，其成分可能有差异。 使用试剂盒提取质粒，分离基因组DNA，其原理还是碱裂解法的原理：当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性 而呈絮状，离心时可沉淀下来。

  赞(14)

  回复(0)

  评论

  评论

  登录后参与评论

• 

  lqqqianqi 2011-11-17 00:00:00

  1.wash buffer中加入无水乙醇后，终浓度差不多就是70%的乙醇溶液了，在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，wash buffer就是洗去这些盐杂质的。 2.用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中Z常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的Z终含量占67％左右。因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）。但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵，Z后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15－30分钟即可。如果你没有加无水乙醇，核酸不能沉淀，都随洗液弃掉了。 3.十二烷基硫酸钠（sodium dodecylsulfate）遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾（potassium dodecylsulfate， PDS），钾离子置换了SDS中的钠离子形成了不溶性的PDS，而高浓度 的盐，使得沉淀更完全。大家知道SDS专门喜欢和蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质 沉淀了，让人高兴的是大肠杆菌的基因组DNA也一起被共沉淀了。这个过程不难想象，因为基因组DNA太长了，长长的DNA自然容易被PDS给共沉淀了，尽管SDS并不与DNA分子结合。 需要特别说明的是：醋酸的加入是为了中和NaOH，因为长时间的碱性条件会打断DNA，所以要中和之。基因组DNA一旦发生断裂，只要是50－100 kb大小的片断，就没有办法再被PDS共沉淀了。所以碱处理的时间要短，而且不得激烈振荡，不然Z后得到的质粒上总会有大量的基因组DNA混入。

  赞(12)

  回复(0)

  评论

  评论

  登录后参与评论