【色谱学堂】采用Quasar AQ超GX液相色谱柱进行华法林分析
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华法林是目前世界上应用Z广泛的抗凝剂,用于稀释血液和预防血栓。早在上世纪20年代,人们意外发现美国的牛羊吃下发霉变质的三叶草后会出血致死。然而,在很长一段时间内,人们对导致出血的确切物质仍旧毫无头绪。
经过对发霉的三叶草的数年研究,Z终从中提取了一种化合物,后来被称作双香豆素。据观察,这种双香豆素本身无法单独作为抗凝剂。但一旦经过真菌代谢,双香豆素就会表现出抗凝血特性,因此吃下发霉的三叶草才造成了牛羊出血不止。
经过进一步研究,从双香豆素中合成了一种更有效的抗凝血剂⸺华法林。华法林Z早于1948年作为老鼠药投入商用,随后于1953年获批应用于人类。
本应用简报介绍了采用Quasar AQ液相色谱柱进行华法林分析,
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- 【色谱学堂】采用Quasar AQ超GX液相色谱柱进行华法林分析
华法林是目前世界上应用Z广泛的抗凝剂,用于稀释血液和预防血栓。早在上世纪20年代,人们意外发现美国的牛羊吃下发霉变质的三叶草后会出血致死。然而,在很长一段时间内,人们对导致出血的确切物质仍旧毫无头绪。
经过对发霉的三叶草的数年研究,Z终从中提取了一种化合物,后来被称作双香豆素。据观察,这种双香豆素本身无法单独作为抗凝剂。但一旦经过真菌代谢,双香豆素就会表现出抗凝血特性,因此吃下发霉的三叶草才造成了牛羊出血不止。
经过进一步研究,从双香豆素中合成了一种更有效的抗凝血剂⸺华法林。华法林Z早于1948年作为老鼠药投入商用,随后于1953年获批应用于人类。
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- 【色谱学堂】使用Quasar Biphenyl色谱柱对维生素C进行GX液相色谱分析
维生素 C,又称抗坏血酸或 L-抗坏血酸,是一种水溶性维生素,存在于各种食物之中,包括辣椒、猕猴桃、橙子和羽衣甘蓝等。人们认为,维生素 C 是预防坏血病的必需营养素,能够参与人体组织修复,并且可以降低癌症风险。它是多种酶作用所必需的物质,并且对免疫系统功能起到重要作用。维生素 C 于1928 年首次被分离出来, 之后成为shou个实现商业化生产的维生素。如今,维生素 C 被广泛用作膳食补充剂。
本文简要介绍了使用 Quasar 联苯色谱柱对维生素 C(图 1)进行的分析。
图1. 维生素 C 的化学结构
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- 【色谱学堂】采用Quasar联苯色谱柱进行合成抗生素环丙沙星的HPLC分析
环丙沙星是 1987 年上市的shou个氟喹诺酮类药物,作为一项重要的医学突破,推动这一新型抗生素的进一步研究。1981 年,德国拜耳公司研制出环丙沙星,成为目前Z有效的氟喹诺酮类药物。它是一种广谱抗生素,用于ZL多种细菌感染。研究文献提出使用 C18 HPLC 色谱柱。然而,由于环丙沙星含芳香族官能团,因此非常适合应用苯基固定相。本应用简报介绍了采用 Quasar 联苯色谱柱分析合成抗生素环丙沙星。
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《采用 Quasar 联苯色谱柱进行合成抗生素环丙沙星的 HPLC 分析》
- 【色谱学堂】使用Quasar C18GX液相色谱柱有效分离磺胺类药物
磺胺类药物是人类史上diyi组人工合成的KJ药物,用于预防人体细菌感染。百浪多息 (Prontosil)是世界上diyi种商品化的磺胺类药 物,由拜耳公司(Bayer)的研究人员在 1932 年研制成功1。接下来的几年里,KJ药物迅速发展,到了 20 世纪 40 年代,磺胺的应用已经十分广泛。尽管此类药物相对安全,但也经常引起皮疹、发烧和恶心等过敏反应。随着低毒性衍生物的引入,尤其是青霉素的大规模生产,磺胺类药物的使用量已经下降。
短效合成磺胺类药物可有效抵抗多种病原微生物,现已广泛用于兽医学2。当与青霉素和金霉素联合服用时,磺胺噻唑可显著提高增重率,并改善饲料转化率3。
本文简要介绍了使用Quasar C18 GX液相色谱柱有效分离三种磺胺类药物(图 1)。
图 1.磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶和磺胺甲恶唑的化学结构。
实验条件
方法参数
所有GX液相色谱法的参数如表 1 所示。
表 1.GX液相色谱法的参数。
溶剂和样品
所有溶剂均为GX液相色谱级的溶剂,并且所有样品都采用 0.45µm 尼龙过滤器进行过滤。
结果和讨论
使用 Quasar C18 色谱柱(长度:150 mm)成功分析磺胺类药物(如图 1 所示)只需 10 分钟不到的时间,如 图 2 所示。Quasar C18 的液相非常适合用来分析小分子(如上述抗生素),其采用Z佳配体键合过程来提供优异的表面覆盖率。由此产生的高柱效提高了色谱柱的分离能力。因此,使用 Quasar C18 分离结构相似的化合物时,化合物的分离度将高于基线分离度。
图 2.(i)磺胺噻唑、(ii)磺胺甲基嘧啶和(iii)磺胺甲恶唑的GX液相色谱分析图。
结论
·Quasar C18 GX液相色谱的液相能够GX分离这些早 期的KJ化合物;
·即便在分析碱性分析物(例如:本文所述磺胺类药物)时,超高纯度的二氧化硅基质和低残留硅醇的活性也 能产生优异的峰形;
·Quasar C18 的液相采用Z佳配体键合过程,从而提供 优异的表面覆盖率。由此产生的高柱效提高了分离结构相似的化合物的能力;
·当换成超GX液相色谱分析法,且使用装填有 1.7 μm 颗粒的较短 Quasar C18 色谱柱时,所需的分析时间可 能会进一步缩短。
消耗品
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参考文献
1.Oxford Handbook of Infectious Diseases and Microbiology. OUP Oxford. 2009. p. 56. ISBN 9780191039621.
2.Bernd Mertschenk, Ferdinand Beck, Wolfgang Bauer (2002). "Thiourea and Thiourea Derivatives". Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry. Wiley-VCH. doi:10.1002/14356007.a26_803.
3.3. Sulfathiazole (WHO Food Additives Series 25) http://www. inchem.org/documents/jecfa/jecmono/v25je07.htm
- 【色谱学堂第二讲】使用Quasar表面多孔颗粒亲水性相互作用液相色谱柱对水溶性维生素进行分析
1906 年,英国生物化学家弗雷德里克•哥兰•霍普金斯爵士(Sir Frederick Gowland Hopkins)也发现:某些食物因子对健康起到重要作用。我们如今所认识的所有维生素都是在20 世纪初发现的1。维生素可分为两类:脂溶性维生素和水溶性维生素。这两大类维生素均被视为生物体维持正常生长和整体健康的必要条件。
维生素 B2(核黄素)和维生素 B3(烟酰胺)是水溶性维生素,天然存在于许多食品之中,包括牛奶和鸡蛋。这两种维生素都可以作为膳食补充剂,有助于降低胆固醇和预防偏头痛2。
1990 年,Alpert 首次提出了亲水性相互作用液相色谱(HILIC)法。此方法提供了一种在极性固定相上有效地分离小极性化合物的替代方法。小极性化合物在反相条件下不能很好地保留3。在亲水性相互作用液相色谱柱中,水是Z强的溶剂;由于流动相通常含有少量的水,因此,这种方法非常适用于质谱检测法。
本文简要介绍了使用 Quasar SPP HILIC 色谱柱的亲水性相互作用液相色谱模式有效分离维生素 B2 和维生素 B3(图 1)。
图1.维生素 B2 和维生素 B3 的化学结构。
实验条件
方法参数
所有GX液相色谱法的参数如表1 所示。
溶剂和样品
所有溶剂均为GX液相色谱级的溶剂,并且所有样品都采用0.45µm 尼龙过滤器(零件号:02542880)进行过滤。
结果和讨论
所有极性色谱表面都可以用于亲水性相互作用液相色谱分离。典型的亲水性相互作用液相色谱柱的固定相由常规的裸二氧化硅或经极性官能团改性的二氧化硅组成。亲水性相互作用液相色谱法是正相(NP)、反相(RP)和离子色谱技术的混合体(图 2)。反相洗脱液与正相的固定相和离子色谱法的带电分析物相结合,产生了亲水性相互作用液相色谱法的基础。诸多文献都已经讨论过此方法的分离机制,但是人们普遍认为:极性固定相(而非缺水的流动相)上会形成一层富含水的表层,从而产生液体/液体隔离。然而,这种分离机制比单独的隔离更复杂,使用偶极-偶极相互作用和静电相互作用可以加强保留。
图2.亲水性相互作用液相色谱法是一种混合技术。
极性较大的化合物与固定相液体层之间的相互作用更强, 因此,其保留时间比极性较小的化合物要长。洗脱顺序与反相GX液相色谱中观察到的顺序相反。
维生素 B2 和维生素 B3 含有几种极性官能团,这些极性官能团可以处于带电状态,并利用烷基链键合相和传统的反相分离,使保留变弱。因此,它们非常适合使用亲水性相互作用液相色谱法进行分离。如图3 所示,在亲水性相互作用液相色谱法模式下,这些极性化合物能够轻松保留,而维生素 B2 在维生素 B3 之后洗脱,因此, 它的极性更强。
图3.(i)维生素 B2 和(ii)维生素 B3 的GX液相色谱分析图。
结论
Quasar 表面多孔颗粒亲水性相互作用液相色谱柱的相是一种无键合的二氧化硅相,用于亲水性相互作用液相色谱法的分离模式;
与反相分离相比,极性化合物的保留有所增强,而维生素 B2 和维生素 B3 的保留良好;
由于流动相的有机质含量高,因此,亲水性相互作用液相色谱模式能够增强质谱灵敏度。
与传统的多孔二氧化硅色谱柱相比,采用表面多孔颗粒相的实心核和多孔二氧化硅外涂层可以将成本降低50%,并将效率提高50%。
消耗品
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参考文献
1. https://www.vitamins-nutrition.org/vitamins/history-vitamins.html
2."Riboflavin". Drugs.com, The American Society of Health-System Pharmacists. 1 August 2018. Archived from the original on 30 December 2016. Retrieved 7 November 2018.
3. Alpert AJ. J Chromatogr A. 1990;499:177–196
- 【色谱学堂】采用Quasar C18色谱柱进行半合成抗生素阿奇霉素的HPLC分析
阿奇霉素Z早发现于 1980 年,是一种衍生自红霉素的半合成大环内酯类抗生素。1这种药主要用于ZL各种细菌感染,包括呼吸道感染、急性细菌性鼻窦炎、皮肤感染、莱姆病和一些性传播感染。2阿奇霉素的作用方式是通过与细菌核糖体的 50S 亚基结合来YZ细菌蛋白质合成,从而YZ信使核糖核酸(mRNA)的转化。3
关于分析阿奇霉素的美国药典(USP)专论指出使用高 pH 流动相(pH 11),需要用到专门的价格昂贵的色谱柱。此方法还采用安培电化学检测,这在许多实验室中通常无法实现。带 UV 或 PDA 检测器的 HPLC 是一种不错的替代方案,大多数实验室都可以实现。1本应用简报介绍了 Quasar™ C18 色谱柱在阿奇霉素分析中的应用。
实验条件
方法参数
所有GX液相色谱法参数参见表 1。许多文献方法提出采用 C18 色谱柱(250×4.6mm,5μm 或 150×4.6mm,5μm)来分析阿奇霉素。本应用简报详细介绍了采用Quasar C18 150×4.6 mm,5μm 色谱柱,缩短长度的同时减少分析时间。
表1. GX液相色谱法参数。
溶剂和样品
所用的所有溶剂和试剂均为 HPLC 级。使用磷酸二氢钾(KH2PO4)和磷酸氢二钾(K2HPO4)制备磷酸盐缓冲液(pH 7.5,0.03M)。
在 10mL 容量瓶中取 60/40 的甲醇/缓冲溶液,溶解一定量的阿奇霉素盐酸盐(相对分子质量 =785.02 g/mol),相当于 10mg 阿奇霉素(相对分子质量 =748.98 g/mol),制得 1 mg/mL 阿奇霉素标准溶液。在分析之前,用 0.22 μm 尼龙滤膜(P/N:02542881)将标准溶液过滤。
结果和讨论
采用 Quasar C18(150×4.6 mm,5μm)色谱柱进行的阿奇霉素(图 1)分析得到的保留时间不足 9 分钟(图 2)。Quasar C18 色谱柱非常适用于阿奇霉素等小分子物质分析,通过配体/分析物相互作用实现Z佳保留性能。同时,由于 Quasar 固定相的硅基具有超高纯度且残留硅醇活性较低,从而得到了极 佳的峰形(表 2)。在 5% 峰高处测得不对称因子。
图 1. 阿奇霉素的化学结构。
图 2. 采用 Quasar C18 色谱柱(150×4.6 mm,5μm)对阿奇霉素进行 HPLC 分析。
表2.结果汇总
在5%峰高处测得不对称因子。
进样的稳定性,特别是柱效和不对称因子如图 3 所示。结果显示,在此方法的高温和高 pH 情况下,50 次进样表现出极好的稳定性。
图 3. 在 50 次 pH 7.5 阿奇霉素标准溶液的进样过程中评估柱效和不对称因子。
结论
·在此方法的高温和高 pH 情况下,Quasar C18 HPLC 色谱柱可以稳定地分离半合成抗生素并表现出极好的稳定性。
·即使阿奇霉素含有某种极性官能团,但由于硅基具有超高纯度且残留硅醇活性较低,仍得到了极 佳的峰形。
·使用保留性能较差的 Quasar C8 色谱柱可以缩短运行时间。
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《采用Quasar C18色谱柱进行半合成抗生素阿奇霉素的HPLC分析应用简报》
参考文献
1. F. Al-Rimawi and M. Kharoaf, Analysis of Azithromycin and Its Related Compounds by RP-HPLC with UV Detection, Journal of Chromatographic Science, 48, 2010, 86-90.
2. https://www.nhs.uk/medicines/azithromycin/. Date accessed: May 2019.
3. 3. J. Retsema, A. Girard, W. Schelkly, M. Manousos, M. Anderson, G. Bright, R. Borovoy, L. Brennan, and R. Mason, Spectrum and Mode of Action of Azithromycin (CP-62,993), a New 15-Membered-Ring Macrolide with Improved Potency against Gram-Negative Organisms, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 31, 1987, 1939-1947.
- 【色谱学堂】使用表面多孔颗粒色谱柱技术对进行GX液相色谱分析
Z初提取自罂粟,数千年前就用于娱乐和医YY途。罂粟中Z活跃的物质是吗 啡。19世纪早期,人类就从罂粟中提炼出纯净的吗 啡。由于阿 片类药物具有成瘾性,因此科学家们研发了合成靶标,用于在维持治LX果的同时,减少使用者的依赖性。
Ultram 等品牌销售的是一种用于ZL中度至中重度疼痛的阿 片类止痛药。1963年,西德的一家制药公司格兰泰(Grünenthal GmbH)申请了的ZL,并于1977年以“Tramal”的商品名推向市场。
一些科学文献记载了多种用于分析的不同色谱柱化学试剂;从氰基色谱柱到C18 烷基相和C8烷基相,再到离子对试剂的添加。不过,由于当代的液相化学试剂的使用,可以无需添加离子对试剂。本文简要介绍了利用带极性内嵌酰胺官能团的表面多孔颗粒色谱柱对(图 1)进行的分析。
图 1.的化学结构
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《使用表面多孔颗粒色谱柱技术对进行GX液相色谱分析应用样本》
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