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- 狂想XXOO的岁月 2017-07-02 00:00:00
- 如何用培养的细胞做PCR 细胞培养物污染往往是细胞培养实验室Z常遇到的问题,有时会带来十分严重的后果.细胞培养污染物主要分为两类,一类是化学污染物,例如:培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂和去污剂,另一类是生物污染物,例如:细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染.尽管无法彻底消除污染,但是可以通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术,降低污染发生的频率和严重程度. 细菌是一大类广泛存在的单细胞微生物.细菌直径一般为几个微米,外形多样,例如:球状、杆状和螺旋状.细菌由于分布广泛、生长迅速以及体积大小的特点,与酵母和霉菌一起构成了细胞培养中Z常遇到的生污染物.培养物被细菌污染后,几天内即可通过简单的肉眼观察发现;被感染的培养物通常呈云雾状 (即:浑浊状),有时表面会覆盖一层薄膜.另外,经常还会发现培养基的 pH 值突然降低.在低倍显微镜下可见,细菌为细胞之间移动的微小颗粒,在高倍显微镜下观察可以分辨出各个细菌的形状. 酵母是真菌界的一种单细胞真核微生物,大小从数微米 (多见) 到 40 微米 (罕见) 不等.与细菌污染类似,培养物被酵母污染后也会变得浑浊,特别是进入污染后期时.培养物被酵母污染后 pH 值变化极小,污染严重时 pH 值才会升高.在显微镜下,酵母呈单个卵圆形或球形颗粒,有些会芽生出较小的颗粒.霉菌是真菌界的一种真核微生物,以被称为菌丝的多细胞丝状体形式生长.这些多细胞丝状体构成的交联网络含有遗传性相同的细胞核,被称为集落或者菌丝体.与酵母污染类似,霉菌污染初期培养物 pH 值会维持稳定,污染加重后 pH 值会迅速升高,导致培养物浑浊.在显微镜下,菌丝体通常呈细束状纤维,有时呈较为密集的孢子团块.许多种霉菌的孢子在休眠期均可耐受极端严峻、不利的环境,当其遇到合适的生长条件时才会被活化.
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