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- heitiansh1 2012-01-01 00:00:00
- 首先你要知道这个基因的背景,如果这是个已知的基因,那么你需要调去这个基因的全编码序列,然后根据这个编码序列设计PCR引物,上游引物中应含有完整开放可读框的启动子,下游引物因含有完整开放可读框的终止子。接着,你需要提取链霉菌的基因组DNA,接着用基因组DNA作为模板,用之前设计的引物进行PCR扩增。当然,如果你这是个未知的基因,那么你需要纯化获得目标基因的蛋白质产物,然后进行蛋白质的肽链测序,N端测十个左右氨基酸残基,C端测十个左右氨基酸残基,然后去查相应的密码子编码表,接着设计不同的引物,再利用基因组DNA作为模板去扩增。这个方法其实现在已经基本不用了,现在的基因序列数据库是很强大的。而且链霉菌也已经完成了基因组测序,一般直接在NCBI上blast就能拿到目标基因的序列了,所以diyi种方法就OK。
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