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真菌的DNA提取方法有哪些?要详细操作步骤

wallaic000 2018-01-06 10:05:51 472  浏览
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  • 教学的规划 2018-01-07 00:00:00
    (一) 1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉 2.加入4mL提取液,快速振荡混匀 3.加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1),涡旋3~5min(此处是粗提没有加酚,可以节约成本的哟!) 4.1000rpm,4℃,5min 5.上清用体积的氯仿:异戊醇(24:1)再抽提一次(10,000 rpm,4℃离心5 min) 6.取上清,加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 min 7.用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干,重悬于500 ulTE中 8.加入1 ul RNaseA (10 mg/mL),37℃处理1 hr 9.用酚(pH8.0):氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次(10,000 rpm,4℃离心5 min) 10.取上清,1/10V 3M NaAc,2.5V体积的无水乙醇, -70℃沉淀30 min以上 11.沉淀用75%乙醇漂洗,风干, 溶于200 ulTE中,-20 ℃保存备用 DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1%SDS, 3M NaAc (二) 1.真菌菌丝0.5-1 g, 在液氮中迅速研磨成粉 2.加入3 mL 65℃预热的DNA提取缓冲液,快速振荡混匀65℃水浴30 min, 期间混匀2-3次 3.加入1 mL 5M KAc,冰浴20 min 4.等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000 rpm,4℃离心5 min) 5.取上清,加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇, 混匀, 静置约30 min 6.用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干,重悬于500 L TE中 7.加入1 ul RNaseA (10 mg/mL),37℃处理1 hr 8.用酚(pH8.0):氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次(10,000 rpm,4℃离心5 min) 9.取上清,1/10V 3M NaAc,2.5V体积的无水乙醇, -70℃沉淀30 min以上 10.沉淀用75%乙醇漂洗,风干, 溶于200 ul TE中,-20 ℃保存备用。

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烟雾试验箱操作步骤有哪些

试验前操作步骤说明

3-1  接气:

   将准备好的气源插入盐雾机背部调压阀,并将压力调整至2kg/cm2。详见2-2气源准备。

3-2  加水:

a) 试验室加水:打开电源,注意观察试验室低水位指示灯(面板上靠左边的低水位灯),如果指示灯亮起,那么说明试验室缺水。

将试验室上盖打开,直接将准备好的纯净水倒入箱内,直至试验室低水位指示灯熄灭(说明试验室水位已加满),注意加水过程中不要将水洒进盐水预热槽(位于喷雾塔下方)。

b) 压力桶加水:注意观察压力桶低水位指示灯(面板上靠右边

的低水位灯),如果指示灯亮起,那么说明试验室缺水。

在盐雾机背部有一个灰色的漏斗状注水口,如图所示:

将注水口红色阀门打开(请注意旋转方向,否则会被拧断),

将准备好的纯净水缓缓加入漏斗里,由于口径不大,水下流

速度较慢,请缓慢耐心加入。直至压力桶低水位指示灯熄灭,         

说明压力桶水位已加好。

c) 密封水槽加水:在盐雾机箱盖四周水槽内需加适量纯净水,以避免仪器工作时盐雾从四周溢漏出来,

3-3  盐水调配及注入:

中性盐雾试验(CNS):

a) 建议准备每瓶500g装的分析纯氯化钠用于试验溶液的调配。

b) 用我们赠送的5000ML防锈塑料桶量取9500ML纯净水,倒入一个更大的干净塑料桶内,加入准备好的500g分析纯氯化钠,搅拌至完全融化,此时盐水浓度比为5%。

c) 缓慢倒入“试药入口”处,如图所示:

此时盐水将逐步流入试验室内的盐水预热槽。

d) 其他质量的分析纯氯化钠请自行按照5%的浓度比进行配置 

3-4  备注

仪器在运行过程中,可能会出现试验室、

压力桶缺水报警,提示我们需要及时的给仪器

进行相对应部位的补水工作,在仪器缺水状态

下,会自动停止工作,以保护仪器本身不会干

烧,正常工作状态如右图所示:

 加水过程中请关闭“操作”按钮,加水方法和     

上述完全一致,待各水位完全加好(所有低水位指示

灯熄灭)之后,再打开“操作”按钮,重新进行工作,

由于我们时间继电器具有自动停电记忆功能,请勿担

心前面所做试验时间被清零。

当盐水缺少时,我们要打开“试药入口”的小盖子进

行观察,如果盐水缺少,请重新调配盐水,并保证工作时

始终有盐水保持。


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熔融指数分析仪操作步骤有哪些

  熔融指数分析仪用于测定各种塑胶、树脂在粘流状态时熔体流动速率MFR值,它既适用于熔融温度较高的聚碳酸酯、聚芳砜、尼龙等工程塑料,也适用于聚乙烯(PE)、聚苯乙烯(PS)、聚丙烯(PP)、ABS树脂、聚甲醛(POM)、聚碳酸酯(PC)树脂等熔融温度较低的塑料测试,广泛地应用于塑料生产,塑料制品、石油化工等行业以及相关院校、科研单位和商检部门。

  熔融指数分析仪适用于《Designation: D 1238-04 Standard Test Method for Melt Flow Rates of Thermoplastics by Extrusion Plastometer1》标准中对规定的热塑性塑料熔体质量流动速率的测定,本标准等同采用了的规定,同时可满足ISO 1133:1997GB T3682-2000 热塑性塑料熔体质量流动速度的测定测试标准。

  本仪器为台式结构、设计合理性能稳定可靠、外形美观、操作方便。

  技术参数:

  1.挤压出料部分

  料筒口直径:9.5504± 0.0076毫米, 符合ASTM D 1238-04 5.2

  料筒长度 :162毫米 符合ASTM D 1238-04 5.2

  料筒外径,传感器开孔,光洁度,硬度 符合ASTM D 1238

  口模口直径:2.0955 ±0.0051毫米 符合ASTM D 1238-04 5.3

  口模口长度:8.000 ±0.025毫米 符合ASTM D 1238-04 5.3

  活塞头直径:9.4742±0.0076毫米 符合ASTM D 1238-04 5.4.1

  活塞头长度:6.35± 0.13毫米 符合ASTM D 1238-04 5.4.1

  2.标准试验负荷(共8级)

  3.温度范围:室温-450℃(铸铜发热圈)

  4.恒温精度:±0.5℃,

  5.显示分辨率:0.1℃

  6.切料方式:可选手动或自动切料

  7.恒温时间:可连续工作

  8.微型打印机自动打印输出

  9.电源电压:AC220V±10% 50HZ

  操作步骤:

  1. 接通电源,开启电源开关,绿色电源指示灯亮,设置测试温度,加热时红色指示灯亮。

  2. 待机20分钟,即预设温度稳定后方可开始工作。

  3. 试样准备,在天平上称取4--5g ,试样以备测试。

  4. 加料,当温度稳定后即可加料。取出料杆,轻放于耐高温的物体上,把漏斗插入料筒内,边加料边振动漏斗,使料快速漏下。加料完毕,用压料杆将料压实,以减少气泡,再插入料杆,放好定位套,套上砝码托盘(加料操作必须在一分钟内完成)。

  5. 加料完毕后,预热4-6分钟,加上所需砝码,准备切割取样。

  6. 当料杆下降到下标记线时,开始计时切割。下降到上标记线时试验停止。切割取样应在料杆的上下标记线之间。

  7. 每个样条切割间隔时间根据所测物体决定,一般每间隔60s或30s切割一次,每个样条长度一般在20mm---50mm左右。

  8. 样条取舍称重、将肉眼可见气泡的样条丢弃,将保留的样条(至少三个)逐个称重,准确到0.0001g ,求出平均重量。

  9. 计算结果,求出熔融指数。

  10. 测试完毕,用干净纱布将料杆、料筒、口模趁热清洗干净,以备下次测试。


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