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  xwc_2013 2016-12-21 00:00:00

  没有微生物生长的平皿需要灭菌 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料.由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等.另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压. 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用Z广的凝固剂.加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固.但多次反复融化，其凝固性降低. 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用.一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌. 3材料 3.1器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱. 3.2药品试剂 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液. 4流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板. 5步骤 5.1培养基的制备 5.1.1称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入.蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速. 5.1.2溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出.待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分.如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分. 5.1.3调节pH 根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH.测定pH可用pH试纸或酸度计等. 5.1.4溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂.琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分(水需预热).注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦. 5.1.5过滤分装 先将过滤装置安装好（图3-1）.如果是液体培养基，玻璃漏斗中放一层滤纸，如果是固体或半固体培养基，则需在漏斗中放多层纱布，或两层纱布夹一层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤.过滤后立即进行分装.分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞， 引起污染.液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜.固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜. 5.1.6包扎标记 培养基分装后加好棉塞或试管帽，再包上一层防潮纸，用棉绳系好.在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等. 5.1.7灭菌 上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌.普通培养基为121℃20min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份.培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面(图3-2)，斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂. 5.1.8倒平板 将需倒平板的培养基，于水浴锅中冷却到45～50℃，立刻倒平板. 5.2灭菌方法 灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类.本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌. 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种.通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的.蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低.在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力.

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