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上篇文章《寡核苷酸类药物的HPLC分析 (一) TSKgel IEC色谱柱应用例》中我们提到了随着寡核苷酸药物的研发步伐越来越快，对高纯度寡核苷酸产品的需求也日趋旺盛。目前，寡核苷酸主要是通过化学合成法制成，在合成过程中会产生工艺相关杂质和产品相关杂质，离子交换液相色谱法是分析这些杂质的重要手段之一。此篇文章我们将介绍尺寸排阻色谱法在寡核苷酸药物质量控制中的应用。

在寡核苷酸的分析中，尺寸排阻分离模式是基于碱基数量、磷酸基不同导致的分子量差别进行分离，通常用于简单的质量控制或纯度研究。该模式的优点是可以使用接近生理条件的洗脱溶液进行等度分离。有时也会添加水溶性有机溶剂来YZ疏水吸附。

分析不同碱基数目的寡核苷酸

下图是采用两根串联的SEC色谱柱TSKgel UP-SW2000来区分长度相差一个碱基的寡核苷酸混合物 (20-mer和N-1 19-mer)。

TSKgel UP-SW2000是东曹生命科学ZX开发的粒径2μm、孔径12.5nm的硅胶基质SEC色谱柱，主要用于分离分子量范围为1-150kDa的小蛋白、肽和寡核苷酸等生物分子。该色谱柱兼容HPLC和UHPLC系统，因此也能够从传统的HPLC-SEC方法转换到UHPLC。

下图是使用TSKgel G2000SWXL色谱柱分离不同碱基数量的合成寡核苷酸混合物的谱图。为了YZ核酸酶活性，有时会在流动相中添加EDTA等约1 mmol/L的螯合剂。

SEC法分离脂质体包被的siRNA

下图是使用TSKgel SuperSW2000色谱柱对天然型DNA核酸药物Defitelio进行质量分析的示例。

参考文献：Handbook of analysis of oligonucleotides and related Products, Feb.23 (2011) 125, Edited by J.V. Bonilla et al.

寡核苷酸分析用SEC色谱柱

下表中列出了适用于核酸分离的SEC色谱柱。对于＜375 bp的短链核酸或寡核苷酸，UP-SW3000、UP-SW2000、G3000SWXL以及G2000SWXL这几款色谱柱都是比较推荐的。

        gao效液相色谱法在临床实验室中对不同体液中生物标志物的分离和定量起了重要作用。HPLC与其他常规检测器（例如UV，荧光和电化学检测器）相比，更趋向于质量敏感检测。填充材料技术的进步，例如亚微米表面多孔二氧化硅颗粒已经被引入了超高压液相色谱中，在不遇到高背压的情况下提高了分离效率。

        GX液相色谱仪的系统压力较高，色谱柱是产生系统压力的主要部件，高背压会影响很多方面比如反压太高超过流通池的耐受压力，会导致流通池的损坏。恒谱生液相色谱柱均一的粒径保证了流动相稳定的流动，并且确保色谱柱有着较低的柱压。

        恒谱生分析保护柱也具有低背压，不漏液，死体积少等优点，能够减少液相色谱系统内的部分压力。

         除此之外，其他先进技术的引用与结合，在不同程度上优化了液相色谱分析工作方法，例如GX的自动进样器，减少检测器的细胞体积以及数据收集和分析的改进等等。很多实验室每天需要生成数百个样本的多个参数的报告，这些方法都能节约工作时间与提升工作效率。

        临床实验室通常处理数百种生物流体样本，例如血液，尿液和其他体液。需要有效的提取过程与快速分析相结合，才能快速处理如此繁重的工作，但又不影响分析的质量，患者的ZL方法与报告的准确性有很大关系，因此快又准的报告是重中之重。

        本文简要讨论了临床实验室中一些常见的HPLC分析应用。

        生物样品需要事先处理和加工，以消除来自其他成分的干扰，尤其是在血液等液体的情况下。采用溶剂萃取，超滤和固相萃取等方式可防止对检测产生干扰并且可防止色谱柱内部堵塞。预防色谱柱堵塞还可以借助一些液相分析耗材配件的帮助，比如在色谱柱前添加预柱（保护柱）起到过滤颗粒物，化学物，杂质等作用。这些污染物会污染色谱柱、堵塞色谱柱，恒谱生建议在色谱柱前安装分析保护柱可以起保护色谱柱、防止堵塞、延长色谱柱的寿命等作用。

       除了安装保护柱，还可以安装在线过滤器来防止色谱柱堵塞，恒谱生在线过滤器由洁净的高品质不锈钢部件组成，这些过滤器旨在减少色谱柱入口筛板的污染和堵塞问题。

        儿茶酚胺

        儿茶酚胺是一种含有儿茶酚和胺基的神经类物质。儿茶酚胺充当神经递质和肾上腺激素。去甲肾上腺素，肾上腺素和多巴胺是可用于诊断是否患有帕金森氏病，高血压和肌营养不良。以前依靠使用电化学或荧光检测法检测尿液或血浆样品中的儿茶酚胺含量，而使用HPLC检测是一种便捷的新分析方法。

       维他命

         维他命在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。维他命在体内是微量的，在除去存在于体液（例如血液和脑脊髓液）中的干扰化合物后，HPLC提供了灵敏且可靠的维他命估算技术。虽然这样分析技术的成本十分高昂，但是由于具有超高灵敏度和快速处理繁重工作量的优势，一些大型临床实验室还是会采用这种技术。

           糖尿病监测

          糖尿病是以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。HPLC能准确定量地评估糖化血红蛋白被证明是有效控制血糖的监测技术。即使在收集样本两周后，也可以通过HPLC分析血红蛋白HbA1c在专用纸上收集并干燥的血斑。该方法为患者长期血糖控制提供了高灵敏度的检测。

体外渗透测试（IVPT）的目的是测量化妆品/成分在皮肤中的吸收和扩散。请加入Teledyne Hanson和PKDERM，参加这场信息丰富的网络研讨会，时长为45分钟，为您提供一个解决具体应用问题的机会。

本次会议的发言人是PKDERM创始人兼首席执行官、IVPT测试专家Hanan Osman Ponchet。

在网络研讨会期间，您将了解如何、何时以及为什么在实验室进行IVPT，药学和化妆品测试之间的差异，以及在进行IVPT时应采取的预防措施。

IVPT使用Franz型扩散池进行，并根据OECD GD 428和SCCS/1358/10进行。使用该体外预测模型生成的数据对于化妆品成分的安全性评估非常重要，并用于按照欧盟化妆品法规1223/2009的要求填写化妆品产品安全报告的暴露和毒理学概况部分。

我们希望您能加入我们，只需选择一个您适合的时间注册即可。

会议参与时间与参与方式

请识别下图二维码，自行注册参加：

1.北京时间11月29日21：00

2.北京时间11月30日10：00

在液体、乳液、膏霜类的化妆品产品中，有“油包水”型和“水包油”型之分，是化妆品中描述两种不同的（水）分子结构。

油包水型：油包水型(W/O)俗称油包水乳状液（Water-in-Oil Emulsions），顾名思义是油含量比较多、水含量比较少的液体或膏体体系，是由油、水和乳化剂混合形成的。体系的形态是水以小液滴的形式分散于油中，油性成份包覆水性成份，水相是内相或分散相，油是外相或分散介质。

水包油型：水包油型（O/W）俗称水包油乳状液（Oil-in-Water Emulsions），通常是水含量比较高而油含量比较低的体系，与油包水体系正好相反，水性成份包覆油性成份，外相为水相液体居多。

乳化体的应用：乳化体在食品、药品、化工等方面都有广泛应用。乳化体是应用于液体、乳液、膏霜类化妆品中使用Z为广泛的载体，几乎可以传递所有类型的活性成分；在制YF面，油包水型微乳作为蛋白多肽大分子药物的载体可以增加大分子药物的吸收，提高生物利用度；油包水乳化钻井液因其具有良好的润滑性、抗盐钙侵、耐高温等优点，有利于井壁稳定、对产层损害小，在工业领域也颇受青睐。下图为我司显微相机MSX2（具有大靶面高性能、1250万超高分辨率、颜色还原准确等特点）搭配观察奥林巴斯BX53拍摄的化妆品中乳化体系的状态。

W/O型膏霜 40X物镜下观察

O/W型 膏霜 100X油镜下观察

（来源：广州市明美光电技术有限公司）

化妆品行业涉及的产品纷繁多样。对于需要同时生产多类产品的厂商来说，这可能意味着需要选择多家设备供应商。该怎样管理众多供应商？如何选择合适的设备以及保证最 终产品的同一品质？这确是让人头疼的事儿。

做为一家拥有百年经验的全 球公司，IKA是化妆品行业加工技术领域的真正专家。我们与客户数十年的合作经验沉淀于我们的产品中。从乳状液、悬浮液、气雾剂到胶溶液等各类应用，IKA都可以提供成熟完整的解决方案。并且借助相同程序参数保证您从实验室规模完 美可靠地放大到生产规模。

对于化妆品行业的各种应用需求，在IKA，您总能找到适意的解决方案。

液液混合

面霜属于乳液类产品，需要将至少两种常规条件下难以混合的液体均匀地混合在一起。使用 IKA 分散机可以产出稳定的乳液。其运行采用转子-定子系统，具有非常高的剪切力，而且能量投入很低。这样，在整个连续相中，分散相非常精细均匀。

01 magic LAB

这套多功能在线式实验室装置非常适合混合、分散和湿磨功能，最宜开发实验室配方。

02 Ultra Turrax UTC

批次式分散机，用于生产简单乳液。UTC 易于安装在容器盖或支架上。

03 稀释液体

DPV稀释系统。可以通过计量泵，将一种物质连续、均匀地混入另一种物质。混合物料无结块或形成泡沫。比如，要将微量香料混入芳香型护理用品或香水时，选用该系统就非常合适。

固液混合

要制造悬浮液，必须把不溶于液体的固体均匀地分布到在液体进料当中。固体颗粒越小，粒径越均匀，混合产品越稳定。

例如，基底乳液可以在成品制造过程中充当液模。将细磨的固体均匀地添加到这一基质当中，可以达到理想的糊状稠度。IKA 在线式分散机的剪切力强，粒径分布极窄。

01 Dispax Reactor DR

带三级转子-定子的高性能分散机，用于生产稳定的乳液和悬浮液。

02 Ultra Turrax UTE

批次式分散机，用于加速溶解流程的高性能分散机。安装在容器的底部，批次产量灵活。

03 CMX 固液分散机

将粉末快速均匀混入液体。CMX机器配置有两级分散头，可以产生非常高的抽吸力，定转子齿形配置还可根据物料及工艺要求来调整。

IKA工艺系统

IKA除了提供化妆品行业应用的各类单机外，还有批次工艺中用于制造高品质乳状液和悬浮液的紧致解决方案。即IKA的Master Plant MP 和 Standard Production Plant SPP工艺系统。

这两种系统的核心是DBI底部分散机。直接将固体物料和液体吸入分散室，配合循环管路和混合容器不断循环处理。凭借精益求精的创新技术，缩短加工时间，并获得最 佳的分散质量和极广的粘度范围。

应用示例

睫毛膏生产

该系统由IKA Master Plant MP 和熔料罐组合而成，可高效生产睫毛膏。

将蜡、油和硬脂酸盐装入预热的熔料罐，搅拌至完全熔化。同时，在 MP系统中进行水相处理。开启底部DBI 分散机后，将彩色颜料、乳化剂、其他固体和水性液体全部导入水相，进行整体分散。

当 MP 的水相物料和熔料罐的油相物料达到相同温度时，DBI 分散机继续运转，就会促使油相转化为水相。由于双相在分散腔内初步接触并混合，立即会形成精细乳液。经过冷却后，对温度敏感的添加剂物料被导入分散机，无需另外配置出料泵，即使在高粘度物料下，DBI也可稳定处理。

相信IKA，选择高品质！

       高内涵系统不仅仅适用于各种各样的细胞模型，对各种小型的模式生物也非常友好，通过将这些模式生物放在微孔板中，我们就可以用高内涵系统来拍摄和分析它们。本期，我们将继续介绍高内涵与这些模式生物的故事。

拟南芥

拟南芥为两年生草本，一般可长到7-40厘米，是植物学Z为常见的模式生物。其幼苗、根、茎、叶、原生质体均可在高内涵上进行自动成像和分析。

实验一

高内涵用于研究活体拟南芥全叶组织中膜运输的调节，40倍水浸式物镜对拟南芥叶片进行多层扫描，使用高内涵分析软件Harmony识别膜泡转运体，统计其数目、荧光强度、定位等参数[2]（如下图）。

秀丽隐杆线虫

秀丽隐杆线虫在遗传与发育生物学、行为与神经生物学、衰老与寿命、人类遗传性疾病都有非常重要的贡献，成虫体长为1mm，通身透明。一般首先对秀丽线虫进行麻醉，再进行高内涵拍摄。

实验一

分析不同药物处理后秀丽线虫的数量和荧光强度，10倍物镜拍摄多个视野，高内涵分析软件Harmony识别不同线虫，计数并分析线虫的荧光强度[3]（如下图）。

小型藻类

藻类的生长、繁殖与水体环境密切相关，常作为水体污染指示物，用于对水体的实时监测中。小型藻类可放置于微孔板中，通过离心使其贴底，从而进行高内涵的拍摄，根据研究内容不同，一般采用20倍-63倍水浸式物镜进行成像。很多研究中通过对叶绿体的成像来判断藻类的状态，成像过程需要设置针对叶绿素自发荧光特殊的检测方法，即通过设定激发光和发射光，定义一个新的通道（excitation 460-490nm，emission 655-705nm）。

实验一

藻类用于检测水质污染，本研究中，模拟微塑料水质污染，检验裸藻的生长状态，采用20倍水浸式物镜(NA 1.0) 进行成像，绿色为微塑料，红色为叶绿素。（如下图）

生长状态不好的裸藻叶绿素荧光强度减弱，形态发生变化。（如下图）

左图为Harmony软件识别裸藻细胞，中间图为通过形态区分形态正常的梭状裸藻（红色）和因毒性变圆的裸藻（绿色），右图为通过荧光强度区分死亡裸藻（绿色）和存活裸藻（红色）。

参考文献

2.High-throughput confocal imaging of intact live tissue enables quantification of membrane trafficking in Arabidopsis. Plant Physiol. 2010 Nov;154(3):1096-104. doi: 10.1104/pp.110.160325. Epub 2010 Sep 14.

3.Expanding the Biological Application of Fluorescent Benzothiadiazole Derivatives: A Phenotypic Screening Strategy for Anthelmintic Drug Discovery Using Caenorhabditis elegans. SLAS Discov. 2019 Aug;24(7):755-765. doi: 10.1177/2472555219851130. Epub 2019 Jun 10.

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珀金埃尔默致力于为创建更健康的世界而持续创新。我们为诊断、生命科学、食品及应用市场推出独特的解决方案，助力科学家、研究人员和临床医生解决Z棘手的科学和YL难题。凭借深厚的市场了解和技术专长，我们助力客户更早地获得更准确的洞见。在，我们拥有12500名专业技术人员，服务于150多个国家，时刻专注于帮助客户打造更健康的家庭，改善人类生活质量。2018年，珀金埃尔默年营收达到约28亿美元，为标准普尔500指数中的一员，纽交所上市代号1-877-PKI-NYSE。

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