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近期国内新冠疫情频发，防控形势严峻。新冠病毒核酸检测质量对于疫情防控具有重要作用。目前病毒采样管仅需I类医疗备案，产品鱼龙混杂，招标参数关注点浮于表面，往往集中在采样管的材质、 规格尺寸、是否为灭活采样管等方面，忽视了更为关键的保存性能指标，为疫情的“动态清零”和“精准防控”增加了难度。

1►什么是病毒采样管，作用是什么？

病毒采样管是一类用于保存病毒样本活性或维持样本中核酸稳定的一次性检测耗材。病毒采样管一般由一次性采样拭子、一次性病毒采样管和生物安全袋三部分构成。病毒采样管中的红色液体是病毒保存液，分为灭活型和非灭活型两种，根据《区域新型冠状病毒核酸检测组织实施指南（第三版）》中建议“人群筛查应选择具有病毒灭活功能，如含胍盐（异硫氰酸胍或盐酸胍等）或表面活性剂的采样管”。它的优点是能够迅速灭活拭子当中的新冠病毒， 防止检测中出现交叉感染，同时能够抑制核酸酶的活性，维持病毒核酸的稳定。

2►拭子的科技含量与性能指标

一次性采样拭子的是利用植绒技术，将尼龙绒毛垂直喷射在涂有胶水的ABS杆上制成的。可以完整、快速将采集患者病灶处的上皮脱落细胞脱离释放到保存液中，用于病毒检测。
（一）尼龙植绒拭子优势
高吸附：尼龙植绒拭子的“吸附”效率比其他拭子高20%~60%。
快采集：植绒尼龙拭子仅需3秒~11秒即可吸收采集样品；而棉质拭子的取样时间长达15秒~120秒。
高释放：国内一项病原体的采集实验发现，植绒尼龙拭子对病原体的采集后释放效率，在不同稀释浓度下都几乎与无拭子阳性对照组相近；而棉质拭子的病原体采集后释放效率明显偏低，且结果受稀释浓度影响更大。
（二）拭子对人体的安全性
疫情常态化监测使核酸大筛成为生活日常，一周三检、四检，甚至一些服务行业人员需要每天进行核酸检测，拭子需要直接接触口腔和鼻腔粘膜，因此安全性不容忽视。医疗器械生物学评价分别从细胞毒性、皮肤刺激性和皮肤致敏性三个维度，对采样拭子的生物安全性进行评估，帮助我们挑选对人体安全的采样拭子。

3►病毒采样管的科技指标

病毒采样管保存的拭子样本，需要送到分子实验室做核酸检测，由于新冠病毒的遗传物质是RNA，性质极其不稳定，温度太高容易降解，随处可见的核酸酶也会导致其降解，因此采样管能否稳定保存病毒的RNA，成为核酸检测准确性的关键。

采样管质量的好坏，除了“看得见”的指标，更重要的是“看不见”的指标。“看得见”的指标包括采样管材质、工艺水平、密封性，灌装准确度等直接观察的质量指标。“看不见”的指标则包括了病毒核酸的保存效果、最低检测限保存效果、微生物指标、病毒灭活效率等方面，这些指标才是决定病毒核酸检测的关键。

关键指标1：病毒核酸的保存效果

病毒在保存管中被灭活，释放出遗传物质RNA，单链RNA在体外极其不稳定，极其容易发生降解和水解作用，病毒保存液的作用就是维持病毒RNA的完整，抑制降解和水解。温度、运输条件、保存天数都会都对RNA的完整性产生影响。RNA保护的越好，病毒的核酸检测越准确。

不同病毒采样管的保存性能差异很大，上图A和D两品牌采样管分别测试4℃、25℃和37℃保存病毒24小时的核酸检测结果，A保存管ct值与刚采样时的ct值几乎无变化，说明保存效果较好，而D保存管，自第4小时起，已无法检出病毒核酸。

关键指标2：最低检测限保存效果

该项指标目的是为了确保低病毒载量的样本检得出，不发生假阴性误判。国家要求新冠检测灵敏度不高于500拷贝/ml，换言之，只要样本浓度不低于500拷贝/ml，就应该被检测到。而现实情况是，在大规模人群筛查，或者偏远地区核酸采样后，样本并不能立即送到实验室检测，原本病毒载量比较低的样本，有可能RNA降解比较严重，降至500拷贝/ml浓度以下，因此出现漏检，即假阴性检测结果。
关键指标3：微生物指标达到“需氧菌总数(CFU/mL)≤200; 霉菌和酵母菌总数(CFU/mL) ≤ 100”的要求。病毒采样管中的液体为病毒保存液，其中添加了颜色指示剂酚红。正常情况下，液体应为偏碱性，颜色为紫红色。一旦采样管微生物不达标，其繁殖会导致液体pH值下降，保存液由红转黄，可以通过管子液体颜色，直观判断微生物是否达标。微生物的存在会加速病毒RNA的降解，影响核酸检测的灵敏度。

关键指标4：病毒灭活效率
根据《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册 (试行第二版) 》 通知，“人群筛查应选择具有病毒灭活功能，如含胍盐 (异硫氰酸胍或盐酸胍等) 或表面活性剂的采样管，抗疫一线非常需要能直接灭活病毒的样本保存液，这样可以大大提高样本采集、运输过程中的安全性。应具备高效的病毒灭活效率，如下表所示，该病毒保存管可在 1min 达到99.99% 的病毒灭活效率。

4►结语

面对巨大的检测需求和市场，势必会出现良莠不齐的产品，但在关乎国计民生的新冠核酸筛查领域，产品质量比价格更为重要，要坚持品质至上的原则，确保核酸检测的准确性，不要因小失大。 

为落实国务院应对新冠病毒感染肺炎疫情联防联控机制《关于做好新冠肺炎疫情常态化防控工作的指导意见》以及《关于加快推进新冠病毒核酸检测的实施意见》有关要求，指导各地新冠病毒混采检测工作，进一步提升核酸检测能力和效率，推荐使用10合1和20合1混采检测技术。

作为新冠肺炎确诊的金标准，新冠病毒核酸检测质量对于做好疫情防控具有重要作用。

病毒采样管的性能决定了核酸检测质量。因此，我们拿到了其他品牌的10混1、20混1采样管与我司逗邦®采样管进行性能验证。

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实验材料

病毒采样管：

逗邦®、X品牌、H品牌、Q品牌、M品牌

采样拭子：

逗邦®3cm折断点口腔拭子

质控品：新冠质控品S2

浓度：1×104~1×105copies/mL

核酸提取试剂盒和提取仪：

逗邦®（BNP027-2B, M32)

新冠荧光PCR试剂盒：

圣湘（N083-5X0001）

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实验方法

1.样品的准备

将质控品稀释10倍，使用拭子采样后，在10混1采样中加入600μL质控品稀释液，20混1采样管中加入1100μL质控品稀释液，涡旋震荡混匀后静置数分钟。

2.核酸提取

使用BNP027-2B试剂盒进行核酸提取，提取步骤及程序参照试剂盒说明书。

3.核酸检测

将提取到的核酸产物进行RT-PCR。

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实验结果

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实验结论

本次实验来看，无论是10混1还是20混1采样管，逗邦®的检出率均为100%，可有效保证核酸检测分析结果的可靠性。

根据《医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行第二版）》通知，“人群筛查应选择具有病毒灭活功能，如含胍盐（异硫氰酸胍或盐酸胍等）或表面活性剂的采样管。”

灭活型病毒采样管可高效灭活病毒，保护病毒核酸不被降解，且能在常温下保存较长时间，为样品保存及运输节省成本。选择灭活效果好的病毒采样管，有助于确保后续核酸检测质量。

本期实验，我们选取逗邦®一次性使用病毒采样管进行灭活效果测试，过程如下：

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实验材料

病毒采样管：

逗邦®一次性使用病毒采样管（灭活型）

实验材料：

慢病毒（吉凯基因，GCNL0319432），HEK293T细胞

核酸提取试剂盒和提取仪：

逗邦®（BNP027-2B, M32)

新冠荧光PCR试剂盒：

圣湘（N083-5X0001）

逗邦®一次性使用病毒采样管（灭活型）

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实验方法

参考《消毒技术规范》（2002版）病毒灭活试验中描述的检测方法，确定病毒保存管灭活能力。

步骤一：细胞培养

将生长状态良好的HEK293T细胞消化计数后稀释至1×104/mL，按照100μL/孔的体积，每个梯度的病毒做三个复孔，计算所需接种孔数，将细胞缓慢均匀接种至96孔板中。放入37℃，5%CO2培养箱中培养过夜。

步骤二：慢病毒稀释

将病毒滴度为107-108TU/mL的慢病毒按10倍梯度进行稀释，连续稀释3个梯度。

步骤三：病毒灭活

把稀释好的病毒置于室温条件下，与灭活款病毒保存液（批号：220201/220207/220211）按1:1体积比进行混合，置于室温下分别放置1min、5min和10 min进行灭活。

步骤四：终止灭活

采用病毒分离培养基（可用DMEM完全培养基替代）进行1000倍稀释以中和灭活保存液，终止灭活。

阴性对照：为病毒分离培养基对灭活款病毒保存液稀释1000倍的混合液；

阳性对照：为病毒分离培养基对病毒原液稀释1000倍的混合液。

步骤五：病毒孵育

将事先培养的HEK293T细胞中吸弃细胞培养基，每孔加入100μL准备好的病毒混合液，和对应的阳性对照、阴性对照。病毒孵育3小时，每隔30分钟从培养箱中取出晃动一次。

步骤六：细胞培养

孵育结束后，将病毒液吸去，每孔中加入100μL DMEM完全培养基，将96孔板置于37℃，5% CO2培养箱中培养，并观察细胞状态。

步骤七：荧光细胞观察与计数

继续培养48-72h，期间观察细胞状态，若细胞培养液变黄，应换液，对荧光细胞个数适量的孔进行计数，计算病毒滴度。

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实验结果

图1：三批次灭活款病毒保存管在病毒灭活

不同时间后细胞生长情况

表1：三批次灭活款病毒保存管在病毒灭活

不同时间后病毒滴度情况

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实验结论

由图1和表1数据可以看出，慢病毒经灭活1min、5min和10min后感染HEK293T细胞后，在显微镜明场下细胞生长正常；三批次的灭活款病毒保存管与病毒作用5min后，可以有效灭活病毒。