如何清洗细胞培养板
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做完试验以后 细胞板空内留下许多物质,就像胶水似的,用水冲,用试管刷刷都不能清洗干净,就和没清洗之前一样,不知道用哪种简便实用的方法能给细胞培养板清洗干净?(细胞培养板 的每一个孔都非常的小,用手和试管刷都不管用) 谢谢
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- 美约画苑 2008-04-24 00:00:00
- 用中铬酸钾来洗,很好用用的,我以前也做过实验员的哦
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- 294818965 2008-04-23 00:00:00
- (一)玻璃器皿的清洗 一般经过浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四个步骤。 1.浸泡:新的或用过的玻璃器皿要先用清水浸泡,软化和溶解附着物。新玻璃器皿使用前得先用自来水简单刷洗,然后用5%盐酸浸泡过夜;用过的玻璃器皿往往附有大量蛋白质和油脂,干涸后不易刷洗掉,故用后应立即浸入清水中备刷洗。 2.刷洗:将浸泡后的玻璃器皿放到洗涤剂水中,用软毛刷反复刷洗。不要留死角,并防止破坏器皿表面的光洁度。将刷洗干净的玻璃器皿洗净、晾干,备浸酸。 3.浸酸:浸酸是将上述器皿浸泡到清洁液中,又称酸液,通过酸液的强氧化作用清除器皿表面的可能残留物质。浸酸不应少于六小时,一般过夜或更长。放取器皿要小心。 4.冲洗:刷洗和浸酸后的器皿都必须用水充分冲洗,浸酸后器皿是否冲洗的干净,直接影响到细胞培养的成败。手工洗涤浸酸后的器皿,每件器皿至少要反复“注水-倒空”15次以上,Z后用重蒸水浸洗2-3次,晾干或烘干后包装备用。 (二)橡胶制品清洗 新的橡胶制品洗涤方法:0.5mol/L NaOH煮沸15分钟,流水冲洗,0.5mol/L HCl煮沸15分钟,流水冲洗,自来水煮沸2次,蒸馏水煮沸20分钟,50℃烤干备用。 (三)塑料制品的清洗 塑料制品特点:质软、易出现划痕;耐腐蚀能力强、但不耐热。 清洗程序:使用器皿后立即用清水清洗,浸于自来水过夜,用纱布或棉签和50℃清洗液刷洗,流水冲洗,晾干,浸于清洁液15分钟,流水冲洗(15-20遍),蒸馏水浸洗三次,双蒸水泡24小时,晾干备用。 (四)包装:对细胞培养用品进行消毒前,要进行严密包装,以便于消毒和贮存。常用的包装材料:牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、较大培养皿等,近几年用铝箔包装,非常方便,适用。培养皿、注射器、金属器械等用牛皮纸包装后再装入饭盒内,较大的器皿可以进行局部包扎。
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- 实验室细胞培养板步骤
实验室细胞培养板步骤
1、细胞复苏
将冻存细胞从液氮中取出后,在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。将融化的细胞移入离心管中,加入37℃预热的DMEM培养基中(其中胎牛血清约为10%),轻轻吹匀,离心,500g离心2min,弃上清液。
加入DMEM培养基清洗,弃上清液。加入DMEM培养基,轻轻吹打混匀,制成细胞悬液,接种于培养皿/瓶中,在含5% CO2的细胞培养箱中培养。
2、细胞传代
当细胞密度达到80%~90%(过早产量不足,过晚细胞状态不佳,1:2至1:10以上的比率传代培养,一般1:3至1:5细胞一代,即从细胞接种到分离再培养的一段时间,非细胞有丝分裂次数)时,去掉培养基,用1X PBS清洗2次。
加入胰蛋白酶(注意:消化液的量以盖住细胞,消化温度是37℃。显微镜下观察细胞:倒置显微镜下观察消化细胞,若胞质回缩,细胞之间不再连接成片,表明此时细胞消化适度)进行消化,放入细胞培养箱中约2-3min。
加入适量DMEM培养基终止胰蛋白酶消化,转移至离心管后500g离心2min,弃上清液,再加入DMEM培养基清洗,弃上清液。
加入DMEM培养基,轻轻吹打混匀,吸取10微升进行计数,然后按照所需细胞量在含5% CO2的细胞培养箱继续培养。
3、细胞冻存
当细胞密度达到80%~90%时,去掉培养基,用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶进行消化,放入细胞培养箱中约2-3min。加入DMEM培养基终止胰蛋白酶消化,转移至离心管后500g离心2min,弃上清液,再加入DMEM培养基清洗,弃上清液。加入lml冻存液(90%胎牛血清,10%DMSO。 一般来讲血清含量可以在10%-90%之间调整,冻存液中加入血清一方面可以为细胞提供营养,另一方面可以在细胞冻存过程中提供非渗透性保护物质,如蔗糖,白蛋白等从而更好地保护细胞),放入冻存管内(管内有异丙醇,以温度降低的速度),立即放入4℃冰箱中冻存30min,然后放入-20℃冰箱中冻存30min,再置于-80℃冰箱内过夜。
第二天放入液氮中,可以保存至少两年,如不放人液氮,可以保存三个月。
细胞冻存和复苏的原则是:慢冻速融,这样更加有利于保持细胞的活力。冻存细胞不加任何保护剂,会导致细胞内冰晶的产生,从而使细胞产生内源性的机械损伤,引起细胞内环境渗透压,PH,电解质等的改变,进而促使细胞死亡。
4、注意事项
(1)预热培养用液:把已经配制好的装有培养液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热;
(2)用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手;
(3)正确摆放使用的器械:足够的操作空间,不仅便于操作而且减少污染;
(4)点燃酒精灯:注意火焰不能太小;
(5)严格的无菌操作;
(6)贴壁细胞消化适度:消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响,消化过程中应该注意培养细胞形态的变化,一旦胞质回缩,连接变松散,或有成片浮起的迹象就要立即终止消化;
(7)传代细胞所有的操作尽量靠近酒精灯火焰。每次只进行一种细胞的操作,每种细胞使用一套器材。避免交叉感染;
(8)传代细胞瓶口每次打开或者关闭都需要在酒精灯上消毒。
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