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  醉爱鱼62 2017-02-21 00:00:00

  1.wash buffer中加入无水乙醇后，终浓度差不多就是70%的乙醇溶液了，在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，wash buffer就是洗去这些盐杂质的. 2.用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中Z常用的沉淀DNA的方法.乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂.DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合.一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的Z终含量占67％左右.因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）.但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率.折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵，Z后的沉淀步骤要使用无水乙醇.也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA.一般在室温下放置15－30分钟即可.如果你没有加无水乙醇，核酸不能沉淀，都随洗液弃掉了. 3.十二烷基硫酸钠（sodium dodecylsulfate）遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾（potassium dodecylsulfate， PDS），钾离子置换了SDS中的钠离子形成了不溶性的PDS，而高浓度 的盐，使得沉淀更完全.大家知道SDS专门喜欢和蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质 沉淀了，让人高兴的是大肠杆菌的基因组DNA也一起被共沉淀了.这个过程不难想象，因为基因组DNA太长了，长长的DNA自然容易被PDS给共沉淀了，尽管SDS并不与DNA分子结合. 需要特别说明的是：醋酸的加入是为了中和NaOH，因为长时间的碱性条件会打断DNA，所以要中和之.基因组DNA一旦发生断裂，只要是50－100 kb大小的片断，就没有办法再被PDS共沉淀了.所以碱处理的时间要短，而且不得激烈振荡，不然Z后得到的质粒上总会有大量的基因组DNA混入.

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