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求助:微生物蛋白质纯化鉴定

Ap郇示虣k 2017-01-18 03:20:52 511  浏览
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  • 融雪白梅 2017-01-19 00:00:00
    在进行任何一种蛋白质纯化的时候,都要时刻注意维护它的稳定性,保护它的活性,有一些通用的注意事项需要牢记,它们包括: 1、操作尽可能置于冰上或者在冷库内进行。 2、不要太稀,蛋白浓度维持在μg/mL~mg/mL。 3、合适的pH,除非是进行聚焦层析,所使用的缓冲溶液pH避免与pI相同,防止蛋白质的沉淀。 4、使用蛋白酶YZ剂,防止蛋白酶对目标蛋白的降解;在纯化细胞中的蛋白质时,加入DNA酶,降解DNA,防止DNA对蛋白的污染。 5、避免样品反复冻融和剧烈搅动,以防蛋白质的变性。 6、缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环境。 7、在缓冲溶液中加入0.1~1mmol/LDTT(二硫苏糖醇)(或β-巯基乙醇),防止蛋白质的氧化。 8、加1~10mmol/LEDTA金属螯合剂,防止重金属对目标蛋白的破坏。 9、使用灭菌溶液,防止微生物生长。

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