仪器网(yiqi.com)欢迎您!

| 注册 登录
网站首页-资讯-专题- 微头条-话题-产品- 品牌库-搜索-供应商- 展会-招标-采购- 社区-知识-技术-资料库-方案-直播- 视频

问答社区

opc级别引物做rt-pcr怎么样

器会汐er9 2016-09-27 22:12:58 474  浏览
  •  

参与评论

全部评论(1条)

  • fwjb4naio 2016-09-28 00:00:00
      是做反转录还是real time PCR?   反转录的话,可以用oligoT做反转录的引物,得到全部的cDNA,然后再利用特异性的引物去扩增出目的基因。或者直接用特异性的引物去反转录出来目的基因的cDNA,然后再进行PCR扩增。   引物设计的话,跟平常的引物设计应遵循的原则差不多。不过由于是扩增目的基因的coding sequence,所以引物设计的时候只能从coding sequence的两端设计,这样才能得到全长的目的基因。设计时,除了要与cDNA互补的一段外,还需要另外添加Kozac序列和酶切位点序列以及保护碱基,这样扩增出来的PCR产物就可以直接进行酶切连接,连入相应的载体上了。   real timePCR的话,同样根据需要扩增的片段设计引物就行了,没有位置的限制。

    赞(15)

    回复(0)

    评论

获取验证码
我已经阅读并接受《仪器网服务协议》

热门问答

opc级别引物做rt-pcr怎么样
 
2016-09-27 22:12:58 474 1
砂纸怎么样分级别
昨天想去仓库拿张砂纸,他问我想要什么样的,我说砂纸不是都一样吗,结果他带我去看,一看有十几种砂纸,那请问砂纸是怎么样分级别的,
2013-08-30 03:43:34 464 3
有做RT-PCR不用试剂盒的吗
 
2017-03-06 20:13:41 495 1
做试管级别不好能成吗
 
2018-12-07 08:15:19 345 0
大环内酯类抗性基因ermE基因经过RT-PCR扩增之后,引物片段是多长?
大环内酯类抗性基因ermE基因经过RT-PCR扩增之后,引物片段是多长?我在文献中只查到了碱基序列,但是扩增片段长度,没有查到。希望各位大侠帮帮忙告知。
2018-12-13 04:57:13 335 0
做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因
 
2014-12-08 07:26:32 780 2
做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因
 
2015-11-29 20:44:19 644 1
做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因
 
2018-11-19 02:16:13 519 0
组态软件与OPC是什么关系,组态软件是否一定要OPC?
 
2017-12-14 11:53:57 385 1
普通PCR引物 VS qPCR 引物

导读

说起引物,大家都再熟悉不过了。引物,在核苷酸聚合作用的起始时,可以刺激合成另一种大分子,并与反应物以共价键形式连接的序列。在核酸化学中,引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。无论是做普通PCR还是荧光定量PCR,设计合适的引物是非常关键的一步。

普通PCR和荧光定量PCR的检测方式具有较大的差别。荧光定量PCR实时监测与DNA结合的荧光染料激发的荧光,普通PCR通过检测插入DNA中核酸染料的量来测定PCR产物量。荧光定量PCR可以通过扩增曲线进行精确定量,普通PCR则是通过电泳的方式进行定性分析。那么在普通PCR和荧光定量PCR的引物设计方面,有什么相同点和不同点呢?今天小编就给大家汇总一下。

相同处:

▶  序列的查找是一致的。

▶  序列选取应在基因的保守区段。

▶  选取合适的扩增片段大小。

▶  避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对。

▶  避免引物自身形成环状发卡结构。

▶ Tm值在55-65℃,GC含量在40%-60%。

▶  引物之间的Tm相差避免超过2℃。

▶  引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基。

不同处:

荧光定量PCR 引物

▶  PCR产物长度:要求在300bp以内,一般选80-150bp之间。

▶  引物特异性:对引物要求高,尽量减少引物二聚体的产生,熔解曲线要求单一产物。

▶  扩增效率:荧光定量 PCR的目的是进行定量或者相对定量,扩增效率应在90%—110%之间。

▶  多对目的基因同时扩增,文献上查来的引物条件会不同,需要设计尽可能条件一致的引物。

▶  目的基因含量比较低时,需要设计灵敏度比较高的引物。

普通PCR 引物

▶  普通PCR的扩增长度,根据实验的要求不同,一般是从150bp到几千bp不等。

▶  相对于荧光定量PCR,普通PCR对二级结构要求较低。

▶  对扩增效率要求不高。

▶  可以选用梯度PCR仪,选择不同退火温度,对引物退火温度要求不需要一致。


Cielo™实时荧光定量PCR系统

Harness of the power of qPCR


☑   数据可靠性:连续1000次实验后,结果高度一致。

☑  应用灵活性:提供多种qPCR应用分析。

☑   流程智能化:中英文用户界面,触控操作,可多机联用。

☑   在线便捷性:主机可独立运行qPCR程序,数据可USB、Wi-Fi等网络传输。


2022-08-17 10:08:59 226 0
RT-PCR的注意事项是什么?
 
2013-04-19 02:46:44 313 1
RT-PCR实验操作的注意事项
 
2010-11-18 05:41:28 330 1
本人做RT-pcr扩增某基因,如何查找扩增产物的bp?
逆转录成cdna扩增后跑电泳,如何查找该扩增产物的bp来验证?有人说上NCBI上查找,但是具体操作可以指导一下吗?谢谢!
2018-12-08 12:35:19 234 0
如何连phoenix opc server
 
2015-07-11 16:12:54 457 1
现场总线和OPC的关系
请各位高手帮帮忙,我看了半天没明白现场总线和OPC的关系。OPC仅仅是提供了一个转化工业信号到网络信号的功能?它可以替代现场总线里面的网络链接功能么... 请各位高手帮帮忙,我看了半天没明白现场总线和OPC的关系。 OPC仅仅是提供了一个转化工业信号到网络信号的功能?它可以替代现场总线里面的网络链接功能么 展开
2010-10-13 08:10:35 447 2
选购什么样的RT-PCR试剂盒
 
2015-08-16 07:08:59 474 1
超声波探伤级别
轴类零件的探伤处理,级别是根据什么确定的,有没有计算的公式呢?如果有的话怎么计算呢?
2013-07-04 19:37:40 549 2
去离子水的级别 
去离子的级别?有国家标准吗?
2013-06-28 08:51:00 609 2
FRET引物是什么
FRET引物是什么... FRET引物是什么 展开
2010-09-01 18:50:36 656 1
不适合用作测序引物的PCR引物有哪些?
不适合用作测序引物的PCR引物有哪些?
2019-09-12 10:03:17 323 1

11月突出贡献榜

推荐主页

最新话题