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  姐姐是魔鬼 2014-11-16 00:00:00

  先占坑。题主应该把图下的说明也一起放过来的。 问题1、为什么diyi个电泳图左边标了IP:Flag和IB：VSV？到底是IP还是IB的结果？ 答：IB每次只能检一种蛋白，所以要检两种蛋白的话，就需要检两次，一次是用是VSV抗体，一次是用标签抗体Flag；IP是共沉淀，多种蛋白均是带Flag标签表达的，所以一个Flag可以检出多种蛋白。 分析下图B哈，图B被分成3个部分，先看Z上面的一条，意思是，RIP1、RIP2、RIP3、RIP4和cardif这几个蛋白都融合了一个标签蛋白Flag，用Flag的抗体做IP后，再用VSV的抗体做IB，所显示出的条带。可以看到，只用Flag标签蛋白抗体做IP，再用VSV抗体做IB是检不出VSV条带的；而用RIP1、RIP2、RIP3、RIP4和cardif这标签蛋白IP后再IB可以检到不浓度的VSV蛋白，说明了VSV与这5个蛋白有不同浓度的相互作用。图B中间的部分意思是，用flag标签抗体做IP后，产物用Flag抗体做IB有不同大小的条带，说明IP过程是成功地将Flag标签融合蛋白富集纯化的。有的条带不只一条，可能蛋白分解或抗体不特异吧。 哎呀，你这个太复杂，这样说实在太啰嗦，总之呢，你多看看图片的说明，多看看IP与IB的原理，很好懂的。 以上答案仅供参考，如有错误，概不负责，哈哈……

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  我前天订的 2014-11-30 00:00:00

  这位同学，你既然知道了原图的出处，就应该仔细分析一下文献。 在这篇文章里：HEK293T cells were transfected with the indicated VSV or Flag constructs. Immunoprecipitates and cell extracts were analysed by immunoblot. 问题1： IP，代表的是用该蛋白来沉淀，然后用IB的抗体来识别。 问题2：你要看原图，有不同载体的结构，那些条带是相对于不同载体所表达出的蛋白。 问题3：这个是作为加样对照，标示加样量是一致的 问题4：抗体比较好，容易获得，不用针对每一种不同的蛋白采用不同的抗体 问题5：用FLAG做IP，而IB出现结果，说明这两个融合蛋白是相互结合的，光有FLAG，没有RIP不结合。 还有的回答：因为这个图研究的是不同的融合蛋白（看原文），两个条带是因为有磷酸化的发生

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