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　　1. 基本信息

　　下面的应用描述了小鼠巨噬细胞系RAW-264.7（生物安全等级2）在ibidi µ-Slides VI 0.4 和8孔腔室载玻片的培养方案。这是一个特殊的细胞系的例子，用于显示粘附时间，细胞密度和细胞形态的示范。本应用可根据您的具体实验要求进行调整。

　　2. 材料

　　在设置中应用下列材料：

　　·RAW-264.7 (murine macrophages, CLS - Cell Lines Service, Biosafety Level 2) 

　　·Medium: RPMI 1640 with 2 mM L-Glutamin and 10% FBS 

　　·µ-Slide VI 0.4, ibiTreat （ibidi 80606）

　　·µ-Slide 8 well, ibiTreat （ibidi 80826）

　　·Accutase (PAA Laboratories GmbH) 

　　·1x Phosphate buffered saline (PBS) 

　　3. 细胞培养与材料制备

　　在将细胞接种到玻片中之前，按照常规的方法培养细胞。

　　µ-Slide VI 0.4 ：通道玻片和培养基，在37℃和5%CO2培养箱中培养过夜。这对于避免随着时间的推移出现气泡至关重要。为此，在50 ml器中填充适量的培养基，并轻轻地将瓶盖拧紧。在 µ-Slide 8孔载玻片开放孔井中，气泡可排出到大气中。

　　拆开µ-Slide的包装，把它放在µ-Slide支架上，并在准备细胞悬浮液时同时将盖子放在 Luer 适配器/孔上。

　　4. 播种细胞

　　分离细胞：

　　吸出培养瓶中的培养基，并用PBS洗涤细胞一次。每75cm² 烧瓶中加入3-5 ml的Accutase，并将烧瓶放入培养箱中以加快分离速度。如果是RAW-264.7细胞系，则大约需要8分钟。使用Accutase分离的细胞存活率更高。

　　4.1. 将细胞接种到µ-Slide VI 0.4中

　　在µ-Slide VI 0.4建议的细胞浓度：最终细胞数  0.3 x 10 5 cells/cm²，制备浓度6 x 10 5cells/ml。通过将移液器尖端直接放在通道的入口上，将30 µl细胞悬浮液填充到每个通道中。将盖子盖在玻片上，在37°C和5％CO2下孵育半小时以固定细胞。

　　细胞贴壁后，分别用60 µl无细胞培养基填充储液池。 避免将移液器吸头直接指向通道的入口。将玻片放回培养箱中。

　　图1：接种后一小时，在ibiTreat µ-Slide VI 0.4（货号80606）中的RAW-264.7

　　图2: 在ibiTreat µ-Slide VI 0.4中的RAW-264.7，孵育24小时后

　　图3:在ibiTreat µ-Slide VI0.4中的RAW-264.7，培养四天后

　　4.2 将细胞播种在µ-Slide 8 well 中

　　在µ-Slide 8 well建议的细胞浓度：最终细胞数 0.3 x 10 5 cells/cm² ，制备浓度 1.1 x 10 5 cells/ml。将300 µl 的细胞悬浮液注入各孔中。将盖子盖在玻片上，在37°C和5% CO2中孵育。不需要进一步添加培养基。

　　图4：在ibiTreat µ-Slide 8 well(货号：80826)中的RAW-264.7，播种后1小时

　　图5: 在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7，孵育24小时后

　　图6：在ibiTreat µ-Slide 8 well中的RAW-264.7，经过四天的培养

　　为获得最佳的分布的匀的细胞，我们建议使用像µ-Slide VI 0.4 这样的通道载玻片。在8孔腔室载玻片中，细胞密度可能会在孔的整个表面上因点而异，具体取决于细胞播种过程中的处理。

　　5. 免疫荧光染色

　　像往常一样为您的细胞固定和染色。

　　注意：在 µ-Slides 中染色时注意液体的处理

　　µ-Slide VI 0.4 ：更换液体，先吸出两个储液池而不排空通道。 如果您使用的是真空设备，请注意不要将吸头直接放在通道的入口上。 用100 µl新溶液冲洗通道3次。 从一侧添加新的溶液，通过通道流入另一个储液池，然后从另一侧吸出，直到两个储液池都排空。注意通道永远不要干涸！

　　µ-Slide 8孔载玻片：在 µ-Slide 8孔中，无需特殊处理措施。像在任何其他培养皿或孔板中一样的交换液体。

　　下文中，给出了使用以下材料对细胞核和肌动蛋白丝进行染色的示例：

　　细胞核：DAPI（Diamidino pheylindol dihydrochlorid） SIGMA, 32670 

　　肌动蛋白丝：Phalloidin, Alexa Fluor ® 488 Conjugate, LONZA, PA-3010 

　　1. 用3.7% 的PFA在PBS（pH 7.4）中室温下固定细胞10分钟。

　　2. 用PBS清洗细胞三次。

　　3. 用Triton X 100（0.1%）孵育细胞5分钟。

　　4. 用PBS清洗细胞三次。

　　5. 用1%牛血清白蛋白在PBS中孵育20分钟。

　　6. 用PBS清洗细胞三次。

　　7. 在0.2μm浓度下用鬼笔环肽Alexa For 488孵育细胞20分钟。

　　8. 用PBS清洗细胞三次。

　　9. 用DAPI（0.5μg/ml）孵育细胞10分钟。

　　10. 用PBS清洗细胞三次。

　　11. 完全吸出通道并用ibidi封片剂重新填充。 现在样品可在显微镜上观察了。保存在阴暗阴凉处可储存数周。

　　图7：在 µ-Slide VI 0.4中的RAW-264.7用DAPI（细胞核、蓝色）和Phalloidin, Alexa Fluor ® 488 Conjugate（肌动蛋白丝，绿色）

细胞培养实验室除了配备一般实验室的普通常规设备外，还有一些特殊需要的设备，本文将详细介绍。

一、常用的仪器设备

（1）仪器

a）显微镜：倒置显微镜——是细胞培养实验室所必需的日常工作常规使用设备之一，便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。

b）培养箱：体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，大多数情况下，Z适温度是37℃，温差变化一般不应超过±0.5℃，细胞在温度升高2℃ 时，持续数小时即不能耐受，40℃以上将很快死亡。因此需要有能控制温度的培养箱，如具有较高灵敏度的恒温培养箱及CO2培养箱。

c）干燥箱：用于细胞培养箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。

d）水纯化装置：细胞培养对水的质量要求较高，细胞培养以及与细胞培养工作相关的液体的配制用水必须事先严格纯化处理。进行细胞培养时配制各种培养液及试剂等均需使用三次蒸馏水：即使是用于玻璃器皿的冲洗，也应使用二次以上蒸馏水。

e）冰箱：细胞培养室必须配备。a、普通冰箱或冷藏柜——储存培养液、生理盐水、Hank’s液试剂等培养用的物品及短期保存组织标本。b、低温冰箱（-20℃）——用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂，如酶、血清等。

f）细胞冷冻储存器：储存器常用的是液氮容器。根据使用需要分为不同的类型及多种规格。选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小，取放使用方便及液氮挥发量（经济）三种因素。

g）离心机：进行细胞培养时，常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作，通常需要使用离心机。一般可常规配置4000rpm的国产台式离心机，例如细胞沉降，使用80～100g的离心机即可，离心力过大有时可能引起细胞的损伤。

h）天平：常用的有扭力天平、精密天平及各种电子天平。

i）消毒器：一般为高压蒸汽灭菌锅，直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。

j）滤器：目前细胞培养工作中采用的培养用液，包括人工合成培养液、血清、消化用胰酶等常含有维生素、蛋白、多肽、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能，因而上述液体多采用滤过消毒以除去细菌。目前常使用的滤器有Zeiss滤器、玻璃滤器和微孔滤器，各种滤器有其使用原理和特点。

（2）培养器皿

培养瓶：由玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞，胶塞多用于密封培养。国产培养瓶的规格以容量（ml）表示，如250ml、100ml、25ml等；进口培养瓶则多以底面积（cm2）表示。

培养皿：由玻璃或塑料制成，供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常用的培养皿规格有10cm、9cm、6cm、3.5cm等。

多孔培养板：为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂，可同时测试大量样本，易于进行无菌操作。培养板分为各种规格，常用的规格有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。

贮液瓶：常见的为蓝盖瓶，主要用于存放或配制各种培养用液体如培养液、血清及试剂等。贮液瓶分为各种不同规格，如1000ml、500ml、250ml、 100ml、50ml、5ml等。

吸管：主要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、转移液体，常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等规格。无刻度吸管分为直头吸管及弯头吸管，除可以作吸取、转移液体外，弯头尖吸管还常用于吹打、混匀及传代细胞。

加样器（移液器）：分为微量移液器和电动移液器。用于吸取、移动液体或滴加样本。可根据需要调节量的大小，吸量准确、方便。可保证实验样品（或试剂）含量精确，重复性良好。

（3）器械

主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。

常用的有：手术刀或解剖刀、手术剪或解剖剪（弯剪及直剪），用于解剖动物、分离及切剪组织，制备原代培养的材料；眼科虹膜小剪（弯剪或直剪），用于将组织材料剪成小块；血管钳及组织镊、眼科镊（弯、直），用于持取无菌物品（如小盖玻片）夹持组织等；口腔科探针或代用品，用以放置原代培养之组织小块。

二、特殊设备

细胞培养实验室除了应配备上述的基本设备以外，如有条件，可添置一些特殊或先进的仪器设备，以便更有效、更精确、更深入地进行实验室工作。例如：

（1）酶联免疫检测仪——可用于进行免疫学测定及细胞毒性、药物敏感性检测等。

（2）超低温冰箱（-80℃）——便于储存某些试剂及标本。

（3）旋转培养器——用于某些特殊细胞或需要收获大量细胞的培养。

（4）荧光显微镜——进行荧光染色样本的观察。

（5）流式细胞仪——可更精确及快速检测细胞。

（6）用于检测细胞培养条件的各种仪器，例如专门为快速分析细胞培养基中主要或关键营养成分、代谢产物及气体含量设计的多功能细胞培养分析仪、手提式CO2浓度测定仪等。

一，恒温恒湿试验箱用途

可以准确地模拟低温、高温、高温高湿、低温低湿复杂的自然状环境，适用于塑胶、电子、食品、服装、车辆、金属、化学、建材，汽车零部件大学科研单位等多种行业的产品可靠性检测。

二，恒温恒湿试验箱的种类

1、恒温恒湿试验箱又叫高低温交变湿热试验箱，区别在于名称不一样，其功能，特性，原理，结构，用途，使用方法均一样。

2、步入式恒温恒湿室简单点讲就是大型的恒温恒湿试验箱，但其同恒温恒湿试验箱有很多区别。

三，两种恒温恒湿试验设备的共同点

1，均可以可以准确地模拟低温、高温、高温高湿、低温低湿复杂的自然状环境，为产品提供可靠性检测。

2，功能、原理，特性都一样。

四，恒温恒湿试验箱与步入式恒温恒湿室区别

1，适用范围∶恒温恒湿试验箱适用于产品抽检或体积相对不是很庞大的产品的可靠性检测。步入式恒温恒湿房适用于产品批量检查或体积相对庞大产品的可靠性检测。

2，构造∶恒温恒湿试验箱一般内箱采用进口SUS#304 不锈钢镜面板加工成型,壁面耐高温，外壳采用优质冷轧板加工成型或SUS#304纱纹不锈钢，表面磷化静电喷粉经高温处理。步入式恒温恒湿房一般内箱采用SUS#304不锈钢板，外壳采用彩钢板。

3，外观∶恒温恒湿试验箱一般采用一体式，即制冷系统，加热系统，风循环系统，水路系统全部安装在机壳里面，步入式恒温恒湿房一般采用箱体与控制系统分离式。即控制系统一般安装在箱外。

4，体积∶步入式恒温恒湿室相对恒温恒湿试验箱体积较大，安装空间要求也要比较大。

5，生产︰步入式恒温恒湿室要比恒温恒湿试验箱生产周期长，且恒温恒湿试验箱一般在厂家安装调试好就可以直接交给客户使用，而步入式恒温恒湿室需到客户指定地点组装和调试好才可以使用(因步入式恒温恒湿房体积庞大一般不能运输，需拆卸后才可以运输到客户地点)。

6，冷却方式∶恒温恒湿试验箱一般采用风冷式，步入式一般采用水冷式(需安装水塔，水泵，水管)。

7，价格︰步入式恒温恒湿室比恒温恒湿试验箱高很多。

8，电源︰步入式恒温恒湿室一般在三相20KW-50KW，恒温恒湿试验机小很多。

首先恒温恒湿室是一款定制的试验设备，但是如果用户对温度范围没有特别严格的要求的话，我们最大能够为用户提供-70~120℃的试验箱。当然除了这个还可以选择0~120、-20~120℃、-40~120℃，大家都可以根据试验需求进行挑选，因为温度范围不同的设备价格都是不同的，而且能够实现的温度越低，设备的价格也就越贵。虽然温度范围能够保证设备能模拟出样品检测的温度范围，但是还需要保证工作室内的温度均匀度，不然试验可能会因为工作室内温度相差过大而出现误差。

一实的恒温恒湿室以及其他温度试验设备在出厂前都会进行温度均匀度的检测，只有确保内部不同位置的温度和控制器上设定的温度差不超过±0.2℃后，一实仪器才会将合格的试验设备装箱发给用户。不过也有些用户觉得一实能够达到这样的程度，那么其他厂家也是能够顺利达到的。但是实际情况是大部分厂家能够保证试验箱的温度均匀度在±2℃左右，因为温度均匀度算是温度试验箱中的一个难点，在加上国标对这方面的标准非常轻松，所以只要设备能够满足国标要求，那么厂家就会将设备当成合格的试验设备出售。而很多厂家也为了减少生产过程中的成本，不会将资金投入到设备的研发中，所以只要让生产的试验箱能够满足国标的要求之后他们就会将设备出售给用户。而用户在使用户过程中就会因为重复试验耽误大量的时间

弗尔德每周知识小百科旨在分享材料科学领域的科普知识，探索未知，激发热情。每周一小步，材料科学发展一大步。

何为粒度，何为粒度分布

颗粒的大小叫做颗粒的粒度。度量颗粒大小的单位一般用微米或纳米，个别领域也用毫米。在粒度测试中通常用颗粒的直径（粒径）来描述颗粒的粒度用特定方法测定的不同粒径区间内的颗粒占总量的百分数称为粒度分布。粒度分布有多种基准，如数量分布、长度分布、面积分布、体积分布、重量分布等激光法的基准是体积分布，沉降法的基准是重量分布，电阻法的基准是数量 分布不同基准的粒度分布数值不同，理论上不同基准的粒度分布可以通过数学

方法转换，但由于粉体形状千差万别，有时这种转换的误差。

什么是空气质量在线监测站?空气质量在线监测站又称空气站。空气站的功能是对存在于大气、空气中的污染物质进行定点、连续或者定时的采样、测量和分析。为了对空气进行监测，一般在一个环保ZD城市设立若干个空气站，站内安装多参数自动监测仪器作连续自动监测，将监测结果实时存储并加以分析后得到相关的数据。空气质量监测站是空气质量控制和对空气质量进行合理评估的基础平台，是一个城市空气环境保护的基础设施。常规的大气6参数(PM2.5、PM10、O3、SO2、NO2、CO)及气象5参数(温度、气压、湿度、风向、风速)。监测原理主要以光化学法，贝塔射线法或震荡天平法等为主。

标准站可以说是一个城市或地区环境空气保护的基础监测设施，简称大气站。通常是指国家花费高额成本，依据标准的选点原则，将多种符合国标的监测仪器集中于一处小型建筑内。小型建筑的楼顶设置着各种采样设备。将样本采集后送入监测仪器进行检测。同时对于不同监测项目都有独立的一台仪器进行检测。监测方法依据国标规定，并按照规定每周需要专业工作人员对设备进行运维。故建站及运维的成本相当昂贵。这也就是我们通常说的国控点、省控点或市控点。

小型站：小型站和微型站可以说是标准站的一种补充。从成本来看，小型站或微型站的价格要远远低于标准站的建设成本。所以对于大面积布局精细化或网格化监测来说显得更为实际。小型站的大气环境空气质量监测站有两种原理：一种是光化学法，一种是传感器法。这两类监测原理的小型站，都包含主动式采样系统，质控系统，流量控制系统及前端除湿、温度控制等功能。整体硬件的精度比较接近大气站。因为精度相对较高，更适合作为地方管理、环境内部考核的工具，因为小型监测站数据可以标定和溯源，数据质量相对微型站更加可靠。
 

NO2、CO、SO2、O3监测设备参数

PM2.5、PM10监测设备参数

气象参数

风向

测量范围：0～360°

准 确 度：±3°

启动风速：≤0.5m/s

供电方式： DC 12V

输出形式： RS485

负载能力：电流型输出阻抗≤250Ω

电压型输出阻抗≥1KΩ

工作环境：温度-40℃～50℃

防护等级：IP45

线缆等级：额定电压：300V 温度等级：80℃

产品重量：210 g

产品功耗：5.5 mW

 风速

测量范围：0～70m/s

准 确 度：±(0.3+0.03V)m/s （V:风速）

分 辨 率：0.1m/s

启动风速：≤0.5m/s

供电方式：DC 12V

输出形式：RS485

负载能力：电流型输出阻抗≤600Ω

电压型输出阻抗≥1KΩ

工作环境：温度-40℃～50℃

防护等级：IP45

线缆等级：额定电压：300V 温度等级：80℃

产品重量：130 g

产品功耗：50 mW

 温度、湿度

测量范围： -50～80℃         

准 确 度： ±0.3℃             ±5%RH

分 辨 率： 0.1℃              0.1%RH

大气压力

气压

测量范围： 10～1100hPa

准 确 度： ±0.3hPa

分 辨 率： 0.1hPa

供电方式：DC 12V

输出形式：RS485

负载电阻：电压型：RL≥1K

电流型：RL≤300Ω

工作温度：-50℃～80℃