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　　实验室细胞培养板步骤

　　1、细胞复苏

　　将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。将融化的细胞移入离心管中，加入37℃预热的DMEM培养基中(其中胎牛血清约为10%)，轻轻吹匀，离心，500g离心2min，弃上清液。

　　加入DMEM培养基清洗，弃上清液。加入DMEM培养基，轻轻吹打混匀，制成细胞悬液，接种于培养皿/瓶中，在含5%  CO2的细胞培养箱中培养。

　　2、细胞传代

　　当细胞密度达到80%~90%(过早产量不足，过晚细胞状态不佳，1:2至1:10以上的比率传代培养，一般1:3至1:5细胞一代，即从细胞接种到分离再培养的一段时间，非细胞有丝分裂次数)时，去掉培养基，用1X  PBS清洗2次。

　　加入胰蛋白酶(注意：消化液的量以盖住细胞，消化温度是37℃。显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度)进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。

　　加入适量DMEM培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM培养基清洗，弃上清液。

　　加入DMEM培养基，轻轻吹打混匀，吸取10微升进行计数，然后按照所需细胞量在含5% CO2的细胞培养箱继续培养。

　　3、细胞冻存

　　当细胞密度达到80%~90%时，去掉培养基，用1X   PBS清洗2次。加入胰蛋白酶进行消化，放入细胞培养箱中约2-3min。加入DMEM培养基终止胰蛋白酶消化，转移至离心管后500g离心2min，弃上清液，再加入DMEM培养基清洗，弃上清液。加入lml冻存液(90%胎牛血清，10%DMSO。   一般来讲血清含量可以在10%-90%之间调整，冻存液中加入血清一方面可以为细胞提供营养，另一方面可以在细胞冻存过程中提供非渗透性保护物质，如蔗糖，白蛋白等从而更好地保护细胞)，放入冻存管内(管内有异丙醇，以温度降低的速度)，立即放入4℃冰箱中冻存30min，然后放入-20℃冰箱中冻存30min，再置于-80℃冰箱内过夜。

　　第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。

　　细胞冻存和复苏的原则是：慢冻速融，这样更加有利于保持细胞的活力。冻存细胞不加任何保护剂，会导致细胞内冰晶的产生，从而使细胞产生内源性的机械损伤，引起细胞内环境渗透压，PH，电解质等的改变，进而促使细胞死亡。

　　4、注意事项

　　(1)预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热;

　　(2)用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手;

　　(3)正确摆放使用的器械：足够的操作空间，不仅便于操作而且减少污染;

　　(4)点燃酒精灯：注意火焰不能太小;

　　(5)严格的无菌操作;

　　(6)贴壁细胞消化适度：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化;

　　(7)传代细胞所有的操作尽量靠近酒精灯火焰。每次只进行一种细胞的操作，每种细胞使用一套器材。避免交叉感染;

　　(8)传代细胞瓶口每次打开或者关闭都需要在酒精灯上消毒。

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　　hc-2氧指数测定仪用来测定聚合物在燃烧过程中所需氧气浓度（体积百分比）的仪器。聚合物氧指数值是该物质引燃后能保持燃烧50毫米或燃烧时间3分钟所需的氧、氮混合气体中zui低氧的体积百分比。

　　适用标准：

　　GB/T2406.2-2009.用氧指数法测定燃烧行为第二部分：室温试验

　　GB/T5454—1997《纺织品燃烧性能测定—氧指数测定法》

　　GB/T10707-2008橡胶燃烧性能的测定

　　GB/T8924-2005纤维增强塑料燃烧性能试验方法氧指数法

　　GB/T2406—93《塑料燃烧性能试验方法—氧指数法》

　　GB/T10707-2008《橡胶燃烧性能的测定氧指数法》

　　GB/T8924-2005《纤维增强塑料燃烧性能试验方法氧指数法》

　　GB/T23864《防火封堵材料》

　　TB/T3237-2010动车组用内装材料阻燃技术条件

　　技术参数：

　　1、燃烧筒内径：100mm

　　2、燃烧筒高：450mm

　　3、流量计精度：2.5级

　　4、压力表精度：2.5级

　　5、压力表分辨率：0.01MPa

　　6、氧浓度指示表分辨率：0.1%

　　7、气源：GB3863规定的氧气、GB3864规定的氮气（纯度不低于98%）

　　8、试验环境：温度10-35℃，湿度45-75%

　　9、输入压力：0.2-0.3MPa

　　10、工作压力：0.05-0.15MPa

　　11、试样类型：自撑材料和非自撑材料

　　12、电源：AC220V/50Hz

　　安装步骤：

　　1、将仪器开箱后平放在工作台上。

　　2、用随机附件中的塑料增强管将控制箱后的氧氮混合气体输出端与主机底端的管连接头连接起来，并用管卡卡紧。注意：控制箱后面氮气、氧气输入分别对应前面氮气、氧气调节方位，混合气输出端在中间。

　　3、安装好氧气和氮气钢瓶，安好钢瓶上的减压阀。用随机附件中的塑料增强管将控制箱后面板上的氮气、氧气接头分别与氧气，氮气钢瓶减压阀输出端相连，并用管卡卡紧。钢瓶与减压阀由用户自备。

　　4、先将大孔扩散器环柱子朝上放入，小孔扩散器环柱子朝下放入，再将燃烧桶安装在底座上。

　　5、填充玻璃珠及更换夹具。

　　6、点火器是专门为点火选择的点火装置，可以调节火焰的长度。用户在随机携带的点火器气体用尽后可以自行充气（打火机用燃气）或更换。