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　　细胞培养的步骤及注意事项

　　一、 复苏

　　1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

　　2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。

　　3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

　　4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

　　5. 3天换一次培养基。

　　二、 传代

　　1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

　　2. 把原有培养基吸掉。

　　3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。

　　4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

　　5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。

　　6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

　　7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。

　　8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。

　　三、 冻存把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。 冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

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　　移液管的使用步骤：

　　1、使用时应先将移液管洗净，自然沥干。

　　2、用待量取的溶液润洗2-3次，用右手拇指及中指捏住管颈标线以上的地方。

　　3、左手拿像皮球轻轻将溶液吸上，眼睛注意上升的液面。

　　4、当液面上升到标线约1cm以上时，迅速用右手食指堵住管口。

　　5、取出移液管，用滤纸拭干移液管下端及外壁。

　　6、稍稍松开右手食指，使液面缓缓下降，至凹液面与标线相切。

　　7、再将移液管移入准备接受溶液的容器中，使其出口接触器壁。

　　8、容器稍微倾斜，移液管直立，使溶液自由的顺壁流下。

　　9、此时移液管仍残留有一滴液体，不可吹出。

　　移液管的注意事项：

　　1、移液管(吸量管)不应在烘箱中烘干。

　　2、移液管(吸量管)不能移取太热或太冷的溶液。

　　3、同一实验中应尽可能使用同一支移液管。

　　4、移液管在使用完毕后，应立即用自来水及蒸馏水冲洗干净，置于移液管架上。

　　5、移液管和容量瓶常配合使用，因此在使用前常作两者的相对体积校准。

　　6、在使用吸量管时，为了减少测量误差，每次都应从最上面刻度(0刻度)处为起始点，往下放出所需体积的溶液，而不是需要多少体积就吸取多少体积。

　　7、移液管有老式和新式，老式管身标有“吹”字样，需要用洗耳球吹出管口残余液体。新式的没有，千万不要吹出管口残余，否则引起量取液体过多。

　　移液管的使用步骤及注意事项!先和大家介绍到这，如果想要了解更多移液管的信息，可以关注天津本生生物，本生给生物医药客户提供生物实验室检测试剂及耗材，欢迎广大客户来询。

　　细胞培养的步骤和注意事项您需知

　　一、 复苏

　　1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

　　2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。

　　3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。

　　4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

　　5. 3天换一次培养基。

　　二、 传代

　　1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

　　2. 把原有培养基吸掉。

　　3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。

　　4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

　　5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。

　　6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

　　7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。

　　8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。

　　三、 冻存

　　把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。

　　冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

　　细胞培养的步骤和注意事项 先和大家介绍到这，如果想要了解更多细胞培养的信息，可以关注天津本生生物，专业给生物行业客户提供生物实验室检测耗材，欢迎广大客户来询。

　　移液管润洗的步骤及注意事项？

　　移液润洗步骤

　　1、先用自来水淋洗后，用铬酸洗涤液浸泡，操作方法如下：

　　(1)用右手拿移液管上端合适位置，食指靠近管上口，中指和无名指张开握住移液管外侧，拇指在中指和无名指中间位置握在移液管内侧，小指自然放松;

　　(2)左手拿洗耳球，尖口向下，排出球内空气，将吸耳球尖口插入或紧接在移液管上口，注意不能漏气。慢慢松开左手手指，将洗涤液慢慢吸入管内，直至刻度线以上部分，移开吸耳球，迅速用右手食指堵住移液管上口，等待片刻后，将洗涤液放回原瓶;

　　(3)用自来水冲洗移液管内、外壁至不挂水珠，再用蒸馏水洗涤3次，控干水备用。

　　2、待取溶液润洗：

　　(1)摇匀待吸溶液，将待吸溶液倒于一洗净干燥的小烧杯中，将清洗过的移液管JD内外的水分吸干;

　　(2)插入小烧杯中吸取溶液，当吸至移液管容量的1/3时， 立即用食指按住管口，取出，横持并转动移液管，使溶液流遍全管内壁，后将溶液从下端尖口处排入废液杯内;

　　(3)如此操作，润洗了3-4次后即可吸取溶液。
 

　　注意事项：

　　1、移液管不可在烘箱中烘干。

　　2、移液管和容量瓶常配合使用，因此在使用前常作两者的相对体积校准。

　　3、在使用吸量管时，为了减少测量误差，每次都应从最上面刻度(0刻度)处为起始点，往下放出所需体积的溶液，而不是需要多少体积就吸取多少体积。

　　4、需注意移液管管身是否标有“吹”字样，若有，则需要用洗耳球吹出管口残余液体。若没有，千万不要吹出管口残余，否则引起量取液体过多。

　　5、移液管不能移取太热或太冷的溶液。

　　扩展资料：

　　移液管调节液面操作方法：

　　1、取一干净小烧杯，将移液管管尖紧靠小烧杯内壁，小烧杯保持倾斜，使移液管保持垂直，刻度线和视线保持水平。

　　2、稍稍松开食指，使管内溶液慢慢从下口流出，液面将至刻度线时，按紧食指，停顿片刻，再按上法将溶液的凹液面ZD端放至与标线上缘相切为止，立即用食指压紧管口。

　　3、将尖口处紧靠烧杯内壁，向烧杯口移动少许，去掉尖口处的液滴。将移液管小心移至承接溶液的容器中。
 

　　移液管润洗的步骤及注意事项，本生生物小编就分享到这了，看完本文您就应该有了基本的认识和了解相信大家都明白了吧!总的来说，希望对大家有所帮助。

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