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- wypwyp98 2017-03-07 00:00:00
- 1. 将蛋白A-Sepharose置于Tris缓冲液中（超过50倍的量，v/v）充分溶胀。在室温下将其灌入直径为2.5 cm 玻璃层析柱中，用Tris缓冲液使其平衡。 2. 腹水浓稀释于3倍体积的Tris缓冲液，以1~5 ml/min 的速度上样于蛋白A-Sepharose柱，用Tris缓冲液洗柱子直至所有的未结合的蛋白都被洗脱，采用A280监测。 3. 依次用2~3倍柱床体积的柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液以及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白，洗脱下的蛋白直接接入装有中和缓冲液的管中，中和缓冲液的体积应为所收集蛋白体积的1/4。 4. 采用ELISA法检测抗原特异性MAb。 5. 在超滤器中浓缩所分离的单克隆抗体到1~5 mg/ml，所用超滤膜为XM50，将单克隆抗体存于-20℃。
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单克隆抗体是目前使用最为广泛的抗体类产品之一，相比多克隆抗体来说，其具备特异性强、纯度高、重复性好而且能够大批量供应的特点，使得其得到了广泛的使用。单克隆抗体的问世，可以说为免疫学领域带来了一场革命，也从根本上促进了众多领域科学的发展。那么，对于单克隆抗体的几种研发技术，大家了解多少呢?
1、杂交瘤技术。
通过将具备特异性的B细胞与骨-髓瘤细胞想融合所产生的杂交瘤细胞，这里细胞不仅能无限增殖，还可以产生特异性抗体;
2、酵母表面展示技术。
通过将外源靶蛋白基因与特定的载体基因融合后导入酵母细胞中，诱导表达后，使得其分泌出目的蛋白;
3、噬菌体展示技术。
通过将外源蛋白或多肽基因序列插入到噬菌体外壳结构的适当位置，使得目的随着子代噬菌体外壳的表达而表达;
4、转基因动物技术。
将受体动物的一段基因切除，在将目的基因导入到动物基因中，使得其遗传信息发生变化，并能稳定地遗传给后代;
5、纳米噬菌体文库构建。
也就是我们常说的纳米抗体制备技术，通过免疫驼类生物所产生的一种小分子抗体;
这几种研发方法各自的优缺点有哪些?
1、杂交瘤技术。
优点：技术相对成熟，前期获得抗体也非常的简单;
缺点：后续的人源化及分子改造过程相对来说要繁琐很多;
2、酵母表面展示技术。
优点：完备的真核细胞表达筛选技术;
缺点：成功案例较少，技术有待完善;
3、噬菌体展示技术。
优点：通过高通量筛选能获得更多全人源抗体;
缺点：前期建库费时且费力;
4、转基因动物技术。
优点：技术成熟，而且成功案例相对较多;
缺点：限制较多，且需要人源化，周期长，成本高;
5、纳米噬菌体文库构建。
优点：分子小、穿透性强、温度稳定性高;
缺点：后续的分子改造过程更为繁琐;
总的来说，现阶段的单克隆抗体制备方式相对来说都各具优缺点，适合不同的使用环境和需求。所以，我们在后期进行单克隆抗体制备的时候，需要结合自身的情况以及后期的发展来进行综合考虑，只有这样，才能在在控制成本的前提下选择合适的抗体产品。
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