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产油真菌的诱变育种

Y忆风F 2009-02-26 19:26:42 387  浏览
  • 谁能帮忙设计一个产油真菌的诱变育种方案啊?拜托了!微生物方面的高手帮个忙谢谢了!!... 谁能帮忙设计一个产油真菌的诱变育种方案啊?拜托了!微生物方面的高手帮个忙 谢谢了!! 展开

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  • WkJCINKZSL 2009-02-27 00:00:00
    紫外诱变和微波诱变是较常用的物理诱变方法, 它们操作简单,对设备要求不高,不需要昂贵的设备, 比较适合基层单位进行诱变育种。本文就这两种方法 对不同多不饱和脂肪酸诱变效果进行比较研究,为采 用这两种方法进行产油菌株诱变育种提供一些依据 1 试验材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 菌株 本实验室分离并保存。 FR3,刺孢小克银汉霉(Cunninghamella echinulata); AGEDm59、AGEDm 95为菌株AGED激光诱变 株,多形单毛孢(Monoblepharispolymorpha Comu)。 其中FR37-~][麻酸含量、AGEDm59花生四稀酸含 量、AGEDm 95二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸含量 较高。 1.1.2 实验仪器 超净工作台、格兰氏微波炉、索氏抽提器、粉碎机、电子天平; 气相色谱仪:福立9790气相色谱仪,CT-IA氮、 氢、空气发生器(武汉科林分析技术研究所),GPI一2 气体净化器(福立仪器)。 1.1.3 试验试剂 、石油醚、苯、甲醇、氢氧化钾; GLA 甲脂、AA甲脂、EPA甲脂及DHA 甲脂标准 品购白Sigma公司,其他试剂均为分析纯。 1.1.4 培养基 斜面培养基为PDA 培养基;种子和发酵培养基 为PDY液体培养基。 1.2 试验方法 1.2.1 孢子悬液的制备 FR3取7天种龄、AGEDm59、AGEDm 95取l0 天种龄的斜面菌株,用无菌水洗下孢子(并用接种针轻 刮表面),FR3配成10一、AGEDm59、AGEDm 95配 成l0。浓度的孢子液。 1.2.2 诱变及保种 紫外诱变:先打开紫外灯照射30min,取0.5ml孢 子悬液到倒好DPA固体培养基的平皿中,涂布均匀, 放在紫外灯下(紫外灯为25W,照射距离为35cm) 照射,之后置于25℃避光24h培养。随机挑取单菌落 于斜面中保存。 微波诱变:由于微波照射会产生热效应,因此在进 行微波诱变时采用了间歇性照射【6】,即先照射一段时 间后进行冷却,再照射,照射时间为各次照射时间的 累加。250mi三角瓶装100ml经过活化的孢子悬液(即 先在150r/min的摇床上振荡5h)【7】,用中等强度功率 照射,每次照射的时间为l0秒,随机挑取的诱变株都 保存于斜面中。 1.2.3 菌丝培养和收获 把长好的诱变株从斜面转到500ml三角瓶中(内 装200mlPDY液体培养基),置于25℃ 中l50转/分钟 摇床上培养。FR3培养4天,AGEDm59、AGEDm 95 培养6天后下样,用滤布过滤获得湿菌丝体。将所得 湿菌丝体在36℃烘箱内烘干,称重,计算生物量; 1.2.4 油脂提取及甲脂化 将干菌体粉碎,并用脱脂滤纸包好,用100ml乙 醚在43~C进行索氏提取6h,回收溶剂,用N2吹走残 留溶剂称重,计算粗油脂量。油脂甲脂化的方法见参考 文献 1.2.5 气相色谱分析条件 色谱柱:FFAP交联石英毛细管柱(0.25mmx 0.25 pmx30m);检测器:氢火焰检测器(FID);载气:N2(流量60 mLlmin):温度:进样器温度160℃ ,检测器温 度240℃;柱温:160℃升至200℃ (8℃/rnin),继续升 至220℃ (2℃/min),恒温7min,降至160℃ 。 1.2.6 多不饱和脂肪酸含量分析 用微量进样器吸取l 上层清液进样分析,对照 标准品保留时间进行定性,由面积归一化法确定相对 百分含量。 2 结果与分析 紫外诱变中不同致死率对诱变的效果影响较大, 据报道,在致死率为75~80%之间诱变的效果Z好I9J, 3株菌株从致死率为75~80%的照射剂量中共获得105 株紫外诱变株,其中F 为2l株,AGEDm59为58 株, AGEDm95为26株。 微波诱变中致死率对诱变效果的影响不同的研究 有不同的结果,本实验采用的致死率为40~60%【l0】, 从3株菌中共获得78株微波诱变株,其中FR3为27 株,AGEDm59为25株, AGEDm95为26株。 2.1 生物量 从表l的生物量看,AGED系列2株菌紫外诱变 的正诱变率远高于微波诱变,对菌株FR3而言微波诱 变正诱变率略高于紫外诱变。从生物量的平均提高率 和Z大提高率上也得到同样的结果,但提高的幅度不 大,只有菌株FR3微波诱变的Z大提高率和AGEDm59 紫外诱变的Z大提高率超过10%,分别达到10.29% 和l3.87% 。 从结果分析来看,两种诱变方法均不能大幅度提 高生物量。 2.2 油脂产量 从表2可看出,在油脂产量正诱变率、平均提高 率和Z大提高率上微波诱变比紫外诱变有显著提高。 除了AGEDm59两种诱变效果比较接近外,其它的两 株菌的平均提高率和Z大提高率微波诱变比紫外诱变 几乎提高2倍以上,而且微波诱变的Z大提高率比较 稳定,都在20%左右。 从结果分析来看,采用微波诱变来提高油脂产量 可以取得较好的效果。

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中国科学家实现马铃薯、番茄育种重要突破

《自然》杂志同时在线发表了中国农业科学院深圳农业基因组研究所(以下称“基因组所”)黄三文研究员团队的两项重要研究成果,这些突破为实现泛基因组在马铃薯、番茄育种的应用提供了新的方案。

泛基因组(Pan-genome)是一个物种内所有基因组信息的总和。泛基因组相比单一参考基因组,包括了更多的遗传多样性,因此可以揭示更全面的遗传变异信息。此前的研究已经构建了多种作物的泛基因组图谱,但如何充分利用泛基因组的优势解决重要的生物学问题、促进植物遗传育种研究,仍是科学界面临的难题。

构建二倍体马铃薯泛基因组图谱

在其中一项研究中,黄三文团队构建了高质量的二倍体马铃薯泛基因组图谱。

与多数作物不同的是,作为一种四倍体作物,目前的马铃薯品种是利用薯块(马铃薯的块茎)进行无性繁殖的。无性繁殖的方式使得马铃薯的性状衰退,而四倍体遗传的复杂性又造成马铃薯品种的改良十分困难。此外,四倍体的种植需要使用薯块,相比于种子,运输难度要大得多,同时更容易遭受病虫害。

面对这些危机,一个想法是从根源上解决问题:改变马铃薯的繁殖方式。黄三文团队联合国内外单位发起了“优薯计划”,即用二倍体替代四倍体,并用杂交种子替代薯块,彻底变革马铃薯的育种和繁殖方式。

去年,黄三文团队的一项***性突破就已经登上了《细胞》杂志。他们利用二倍体替代四倍体,培育出了借助种子繁殖的***代杂交马铃薯品系。

▲黄三文团队已经培育出二倍体马铃薯杂交种

二倍体马铃薯的可行性已经得到证实,黄三文团队的下一个目标就是充分利用二倍体资源中的优异性状加速杂交马铃薯育种,并且探究无性繁殖方式对马铃薯基因组的影响,以及薯块形成的遗传演化机制。为此,研究团队在***新研究中构建了高质量的二倍体马铃薯泛基因组图谱。

通过对比分析二倍体马铃薯(包括野生种与农家品种)与不结薯的马铃薯姊妹类群的基因组,研究团队取得了一系列重要发现。

马铃薯的薯块是如何长出来的?对于这个重要的生物学问题,这项研究为我们揭示了关键遗传因素。通过马铃薯与姊妹类群的多组学比较分析,研究人员鉴定出一个可能在薯块发育的起始时期发挥关键作用的转录因子。这个薯块身份基因(IT1)与结薯移动信号因子直接互作,正常情况下可以指导形成薯块;但在相应位置出现突变时,植株的匍匐茎顶端无法正常膨大形成薯块。

▲左图为不结薯的马铃薯姊妹类群Etuberosum,右图为结薯材料马铃薯。Etuberosum的地下分枝向上生长发育成新的植株;而马铃薯的匍匐茎向下生长,并且在匍匐茎顶端膨大形成薯块。

这项研究还对马铃薯的抗病基因进行了分析。野生马铃薯的抗病基因,可以作为现代品种抗性改良的重要资源。相比于姊妹类群,马铃薯中的抗病基因拷贝数更多。由于无性繁殖的马铃薯更容易受到病原菌侵袭,因此作者推测,抗病基因数量的增多,是为了应对病原菌感染所演化出的策略。

同时,这项研究鉴定出超过56万个高质量的结构变异,并且***构建了栽培和近缘野生马铃薯的***段倒位图谱。

▲马铃薯倒位图谱

“马铃薯存在大量的结构变异,并且由于长期无性繁殖策略,这些结构变异很难通过有性繁殖被清除出去,”这篇论文的共同***作者,基因组所博士生唐蝶介绍道,“我们对基因组中的倒位进行了系统鉴定,并且结合3号染色体的例子发现倒位会带来严重的连锁累赘现象。”

在马铃薯3号染色体上,一处***段倒位事件与控制块茎中类胡萝卜素积累基因紧密连锁。因此,在筛选***薯块的个体时,也会伴随着其他预期之外的性状。“这个案例提示育种学家,在进行回交育种时需要谨慎地选择合适的供体和受体亲本,避免倒位造成的连锁现象。” 唐蝶表示。

审稿人评价,该研究解析了马铃薯和姊妹类群之间的演化关系,并且对块茎演化提出见解,更重要的是发现了与农艺性状紧密关联的结构变异。这项研究展示了基于广泛选材的泛基因组学的力量,能为其他作物泛基因组研究提供参考方法。

找回番茄“丢失的遗传力”

而在同期发表的另一项研究中,黄三文团队利用泛基因组研究解决番茄的“遗传力丢失”问题,为解析生物复杂性状的遗传机制和番茄育种提供了新思路。

所谓遗传力丢失,简单地说,就是很多性状背后的遗传因素仍然未知。如果能找回这些“丢失的遗传力”,将有助于理解复杂性状的遗传机制,为相关的育种工作提供理论支持。

在这项研究中,黄三文团队利用一项图泛基因组技术对复杂结构变异(SV)进行了检测,从而全面评估遗传变异对遗传力的具体影响。利用番茄的转录组及代谢组数据,研究人员从不同的角度找回了“丢失的遗传力”。

▲番茄图泛基因组研究流程。研究人员利用高准确率的三代测序技术组装了骨架基因组SL5.0和31份具有代表性的材料,鉴定出相关的遗传变异,再整合已公布的结构变异和短片段测序检测的变异,***终构建了来自838个番茄基因组的图泛基因组并用于后续研究。

SV是***主要的遗传力来源。利用单一参考基因组对SV的检测能力有限,而利用图泛基因组的遗传变异,可以将估计的遗传力提高24%。

此外,研究人员尝试利用图泛基因组的遗传变异提高全基因组分析(GWAS)的检测能力,并分别解决了等位基因异质性和位点异质性导致的GWAS检测能力下降的问题,从而进一步提升了遗传力。

这些重新找回的遗传力,可以帮助育种学家培育出具有更优良性状的番茄品种。近年来,番茄的风味正在逐渐减弱,因此有不少科学家尝试恢复番茄的风味。

番茄风味是复杂性状,受多基因控制。“在育种中,我们可以利用基因组选择对风味相关物质含量进行预测。我们找回的遗传力,可以帮助提高预测的准确率,从而提高育种效率。”该论文的共同***作者,基因组所副研究员周姚介绍。

“以影响番茄产量和糖度的重要代谢物可溶性固形物为例,我们共鉴定出了2个潜在的与其含量高度相关的SV。利用这两个SV作为分子标记,我们可以选择出高可溶性固形物含量的个体,” 周姚表示,此外,对于大量微效的基因,可以通过基因组选择进行选择。遗传力越高,基因组选择准确率也就越高。因此,利用SV进行基因组选择,可以取得优于传统方法的准确率。

论文评审专家认为,这项工作是对图泛基因组概念***全面的分析。 “图泛基因组将可能成为基因组分析和作物基因组育种的标准,在这个意义上,这篇论文是奠基性的(foundational)”。

黄三文研究员为两篇论文的通讯作者,基因组所博士生唐蝶、博士后贾玉鑫、中国农业科学院蔬菜花卉研究所助理研究员张金喆和基因组所与荷兰瓦赫宁根大***合培养博士生李宏博为马铃薯文章的共同***作者。基因组所副研究员周姚,博士生张智洋和科研助理鲍志贵为番茄文章的共同***作者。基因组所和国内外多家单位科研人员也为该研究做出了重要贡献。国家基金委、科技部、广东省、深圳市和中国农科院科技创新工程资助了这两项研究。

DNA提取是分析农作物分子生物学性状的重要步骤,现阶段,常用的DNA提取技术有磁珠法和离心柱法,使用磁珠进行农作物的DNA提取,可以实现高通量、自动化的操作。由于磁珠对核酸的吸附灵敏度高,只需要少量的叶片或其他组织即可得到高得率、高纯度的DNA。吉恩特生物采用自主研发生产的纳米生物磁珠和磁珠法DNA提取试剂盒,可以从各种类型的农作物中提取高质量的核酸,配合核酸提取仪,可以达到快速自动化提取的目的。


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全自动样品组织研磨仪在柑橘育种的应用|仪器操作使用方法

前言:农业科学院柑桔研究所(柑桔研究所)位于重庆市北碚区的风景名胜区*。此次研究所将开展柑桔科技创新,促进优势产业发展为重点,科研工作包括种质资源收集、评价与保护,新品种创新与推广等。本次联合上海净信组织研磨仪JXFSTPRP-32研磨仪,开展科学实验。

经常有朋友吐槽柑橘太多种类,分不清橘子和柑橘。其实现有的柑橘家族原本只有三位长老:宽皮橘、柚子和香橼,但后来因为他们的互相杂交,成就了现今多种多样的大家族,如柠檬、葡萄柚、橙等。研究人员发现,柑橘家族杂交的后代符合以下几条规律:

1、个头大和个头小的杂交,后代会偏向于个头小;

2、后代的形状跟双亲的都有点像,这点很接地气;

3、后代糖含量会取中间值,但酸度会偏向于更酸的一方。

所以,甜橙和柠檬的后代也只有更酸的柠檬。为了更好的研究柑橘此次将选用净信冷冻研磨仪来完成前处理操作,详细步骤如下:

实验步骤:

1、准备净信组织研磨仪、离心管、橘子皮样品

2、将采取到的橘子皮样品,放入实验室离心管中

3、加净信研磨珠,把离心管转入净信研磨仪中

4、设置参数及研磨时间

实验效果:

2022-12-16 16:33:18 113 0

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